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苦荞蔗糖合酶SuSy基因在大肠杆菌中的表达及其纯化

2020-07-21李慧婧魏玉梅吴慧昊

甘肃农业大学学报 2020年3期
关键词:苦荞

李慧婧,魏玉梅,吴慧昊

(西北民族大学实验教学部,甘肃 兰州 730000)

蔗糖合酶(sucrose synthase,SuSy)是与蔗糖代谢密切相关的一类关键酶,通常以四聚体形式广泛存在于高等植物中[1],催化可逆反应蔗糖+UDP果糖+UDPG,即在UDP存在时,将蔗糖分解成UDP-葡萄糖和果糖[2],通常认为该酶偏向蔗糖的裂解反应[3].由于UDPG可以作为合成糖苷等糖基化合物的供体,因此该酶是一种糖基转移酶[4].在细胞中,SuSy因存在形式不同而功能不同,如在细胞质中以可溶性形式存在时,主要为淀粉的合成提供产物[5],而结合在质膜上时,为纤维素的合成提供前提物质UDPG[6].此外,该酶在提升植物固氮能力[7]和提高植株抗逆性方面也有着重要意义[8].

已有研究表明,玉米中缺失SuSy基因会导致种子淀粉含量明显减少[9],而当其大量表达时,淀粉和葡萄糖含量又显著升高[10],当玉米sh1基因发生突变时,种子胚乳中的SuSy活性明显降低,淀粉含量也会下降[11];西瓜‘04-12’(自交系)在幼果期时,蔗糖的快速积累与SuSy的活性上升关系紧密[12].与其他作物相比,苦荞淀粉具有低消化性、可溶性糖含量明显较低[13-14],因而被作为糖尿病人首选食疗作物.可以推测,SuSy在苦荞种子淀粉合成、糖代谢调控过程中也发挥着重要作用.燕雪芬等[15]已从苦荞中克隆了SuSy基因,并分析了基因序列.为了进一步探讨SuSy在苦荞中的生物学功能,首先要获得纯化的蛋白,但目前通过原核表达系统表达SuSy重组蛋白方面的报道较少.因此,本研究拟构建苦荞重组表达载体pET28a-SuSy,诱导其在大肠杆……

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