蒋芝 徐君 冯美江

PD是一种与年龄相关的神经退行性疾病，以运动迟缓、静止性震颤、姿势平衡障碍和肌强直等症状为主要临床表现。PD的具体病因及发病机制尚未明确，目前的治疗方式只能改善临床症状，并不能逆转PD的病情进展。近年来，干细胞移植治疗PD引起了人们的关注。人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymalstemcell，HUC-MSCs）来源于新生儿的脐带组织，具有来源广泛、免疫源性低、取材无创性、无伦理问题、不受供体年龄因素影响等优势，成为干细胞移植治疗PD的理想种子细胞［1］。研究证明，HUC-MSCs能被诱导分化为多巴胺能样神经元，移植治疗PD大鼠模型后能改善其行为学症状［2-3］。脑源性神经营养因子（brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF）是神经营养因子家族中的一员，可促进干细胞向神经元的分化、成熟［4］，并提高移植的细胞在PD模型动物脑内的存活能力［5］。据一项meta分析显示，PD病人血清中BDNF水平是降低的［6］。BDNF过表达载体的构建，除了可补充PD病人BDNF的不足外，同时可提高移植细胞的存活率，可能是细胞移植治疗PD不可或缺的部分。本研究旨在体外构建并鉴定BDNF过表达的HUC-MSCs源性多巴胺能样神经元。

1 材料与方法

1.1 材料 荧光二抗（塞尔维生物公司），抗-NeuN抗体、抗-Nurr1抗体和抗-β-tubulinⅢ抗体（北京博奥森），抗-酪氨酸羟化酶（TH）抗体（购自 Abcam），DAPI（南京贝斯特公司），pEGFP-N1-GFP-BDNF慢病毒载体（汉恒生物科技有限公司），碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、成纤维生长因子 8（fibroblast growth factor 8，FGF8）、N2 因子（武汉艾美捷科技有限公司），胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS）、DMEM/F12基础培养基（美国GIBCO公司），Lipofectamine 2000（上海嵘葳达实业有限公司），维生素C（Vit-c）、音猬因子（Sonic Hedgehog，SHH）、BDNF siRNA（5'-GCGCCCATGAAAGAAGTAA-3'，汉恒生物科技有限公司）。……