俞操　王宇皓　姚心怡　沈祥峰

【摘要】目的 探讨运脾和络颗粒对糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy，DPN）大鼠血脂和血清SOD、MDA的影响。方法 链脲佐菌素加高糖高脂造模的大鼠随机分成運脾和络颗粒低、中、高剂量组、甲钴胺组、模型组，另设正常组;采用葡萄糖氧化酶法测血糖，大鼠眼眶取血分离血清检测胆固醇、高低密度脂蛋白、SOD（超氧化物歧化酶）、MDA（脂质氧化终产物丙二醛）的含量，在清洁后的大鼠脱脂尾部采用神经肌电图诱发电位仪测定大鼠尾神经传导速度。结果 对大鼠血糖而言，模型组给药前后血糖均高于正常组，差异有统计学意义（P<0.001）;与模型组比较：运脾和络颗粒高、中、低剂量组都具有一定降糖作用，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）;运脾和络颗粒高、中剂量组大鼠胆固醇、血清甘油三酯、高、低密度脂蛋白明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）;运脾和络颗粒高、中剂量组大鼠血清SOD含量显著升高，MDA含量显著降低，差异具有统计学意义（P<0.01）;运脾和络颗粒高、中、低颗粒组大鼠神经传导速度加快，差异具有统计学意义（P<0.01，P<0.05），作用呈剂量相关性。结论 运脾和络颗粒能降低DPN大鼠高胆固醇、高、低密度脂蛋白;能提高DPN大鼠血清SOD含量，降低MDA含量，调节神经传导速度，改善周围神经病变，这可能是运脾和络颗粒改善和防治DPN的作用机制之一。

【关键词】运脾和络颗粒;DPN;超氧化物歧化酶;防己黄芪汤;丙二醇;血脂

【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.16..03

糖尿病周围神经病变（Diabetic Peripheral Neuropathy，DPN）是糖尿病严重的并发症，神经病变可累及植物神经、运动神经、感觉神经，产生疼痛麻木、神经功能障碍和运动功能障碍。临床上前期出现肢端感觉异常，有时伴痛觉过敏。随后有肢痛，呈隐痛、刺痛或烧灼样痛，后期可见运动神经受累，出现肌张力减弱、肌力减弱乃至肌萎缩和瘫痪。祖国传统医学尚未有DPN病名的载录，纪文倩结合古代典籍与DPN患者疾病过程中表现的临床特点，将本病归纳为“消渴痹证”，即“消渴”伴有“麻木”、“痹症”、“痿证”等[1]，故防治DPN多从化瘀入手。

血脂代谢与DPN发生机制的相关性尚存在争议;氧化应激作为DPN的潜在机制已受广泛关注，而MDA、SOD则是评估机体抗氧化能力的重要指标。既往研究已经证实运脾和络颗粒具有活血化瘀、运脾除湿之效，能够起到改善DPN大鼠神经功能、血流动力状况的作用[2]，故本研究从大鼠脂质代谢与氧化应激的角度出发，通过观察运脾和络颗粒对大鼠血脂和血清SOD、MDA含量的影响，研究并探讨运脾和络颗粒防治DPN的作用及机制。

1 实验材料和方法

1.1 实验动物

清洁型健康雄性SD大鼠80只，体质量（200±15）g，于浙江省实验动物中心购入，许可证号：SYXK（浙）2014-0001 ，由浙江省中药研究所的动物实验室饲养及管理。

1.2 药物与试剂

运脾和络颗粒（当归15 g、黄芪30 g、苍术20 g、赤芍20 g、金银花15 g、苍术20 g、汉防己15 g、玄参12 g、威灵仙12 g）由浙江省中药研究所制剂室提供;甲钴胺：卫材（中国）药业有限公司，国药准字H20143107。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产;葡萄糖（GLU）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDLC）、高密度脂蛋白（HDLC）试剂盒，由宁波市慈城生化试剂厂生产。

1.3 造模与给药

给80只清洁型健康雄性SD大鼠适应性喂养5天后，随机选取10只作为对照组（正常组），剩余70只为造模组。给禁食12 h的大鼠腹腔注射链脲佐菌素50 mg/Kg并于3天后测量血糖，挑选血糖>16.7 mmol/L的大鼠50只。剔除不符合诊断标准的大鼠，随机分成5组，保证各组大鼠体重与血糖均衡。其中模型组10只，甲钴胺组10只，运脾和络颗粒高、中、低剂量组各10只。

1.4 指标检测

实验完成后，在大鼠尾静脉取血，葡萄糖氧化酶法测血糖。实验中分二次对大鼠血清胆固醇和甘油三酯进行测定，分别于给药12周和给药24周时，从大鼠眼眶取血，分离血清，TC与TG测定采用酶法。第24周时测定LDLC，HDLC。于第12周检测SOD、MDA的含量，SOD测定：采用黄嘌呤氧化酶法。MDA测定：采用硫代巴比妥酸法。于第19周测量大鼠尾神经传导速度。

1.5 统计学方法

实验数据采用±s描述，统计学资料使用SPSS 19.0版本软件数据包处理。组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，P<0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠的一般状况

在实验中，正常组大鼠表现机警，反应正常，活动正常，皮毛整齐而富光泽，舌淡红，体重正常并呈上升趋势;其余组大鼠则表现均为饮食、尿量增多，并有一定程度的消瘦，而模型组表现最明显：在第二周开始精神不振，眼眯无神，嗜睡，反应迟钝，活动减少，毛发脱落多，色泽暗淡。实验后期，模型组大鼠舌绛紫红暗，尾部出现皮下瘀紫。运脾和络高、中剂量组的大鼠上述症状得到明显改善，低剂量组有所改善但不明显。阳性对照组甲钴胺组在反应程度、活动度、毛色方面有明显改善，而舌下绛紫、皮下瘀紫方面无明显改善。

2.2 各组大鼠血糖状况

与正常组相比，模型组给药前后血糖均增高（P<0.001）;与模型组相比，其余各组血糖都有降低，而运脾和络颗粒高剂量组血糖降低是最为明显的（P<0.01），而中、低剂量组相对次之（P<0.01，P<0.05）;运脾和络颗粒各剂量组呈现出一定剂量相关性。阳性对照组甲钴胺组血糖有所降低，但不如运脾和络颗粒各剂量组降糖作用明显。给药24周时，运脾和络颗粒各剂量组与给药12周时相比血糖略有提高。见表1。

2.3 DPN大鼠尾神经传导速度情况与运脾和络颗粒的影响

与正常组比较，模型组神经传导速度慢（P<0.001），说明DPN大鼠造模成功，伴随病程延长，神经传导速度逐渐降低。通过运脾和络顆粒各剂量组治疗后，神经传导速度快于对照组（P<0.05）。这意味着运脾和络颗粒在预防和改善DPN上有一定效果。见表2。

2.4 DPN大鼠的血脂情况与运脾和络颗粒的影响

与模型组比较，运脾和络颗粒组能明显降低DPN大鼠的高胆固醇，降低DPN大鼠较高的血清低密度脂蛋白，升高DPN大鼠较低的血清高密度脂蛋白，作用呈剂量相关性。见表3、表4。

2.5 DPN大鼠的SOD、MOD情况与运脾和络颗粒的影响

与模型组比较，运脾和络颗粒组大鼠血清中MDA含量显著降低、SOD含量显著升高，其中以运脾和络颗粒高剂量组最明显（P<0.01），说明运脾和络颗粒能增强抗氧化能力，提高机体免疫力。见表5。

3 讨 论

运脾和络各剂量组均降低DPN大鼠血糖，但于24周时血糖较12周有所提高。查阅相关文献发现，以清热、养阴、生津的中药为主的大鼠降糖试验中[3]，大鼠血糖随给药时间增长而不断降低，也可能提示运脾和络颗粒以健运脾胃功能为主、活血和络为辅，能够降低大鼠血糖并稳定在一定范围内。

目前DPN病因和发病机制尚未完全清晰，有血糖代谢紊乱、脂代谢异常、微血管病变及血流障碍氧化应激损伤、神经营养缺乏、免疫损伤等因素[4]。血脂代谢与DPN发生相关机制尚未明确。早期Knuiman研究发现，血脂紊乱与糖尿病肾脏损害和血管病变成正相关，而与DPN病变无明显相关性[5];但Mohapatra等研究显示血脂异常能够增加DPN的发生风险[6]，Perez-Matos等文献研究显示，多种降脂疗法对DPN改善有积极影响，如他汀类药物降脂治疗、贝特类药物降脂治疗等[7]。国内亦有研究显示，运用活血化瘀补气等中药在降低血脂的情况下能够改善DPN[8-9]。综上，尽管脂质代谢异常与DPN的相关性尚未得出统一研究结果，仍应该将脂质代谢正常化作为预防或治疗DPN的一个目标。本实验显示经运脾和络颗粒高剂量组治疗后大鼠血脂降低，DPN得到改善，这与前述一些学者的研究结果一致。

氧化应激损伤作为糖尿病周围神经病变的潜在机制之一也广受关注。氧化应激是一个细胞内氧化和抗氧化系统失衡的过程，指机体受到刺激后，产生大量活性分子从而导致组织损伤。MDA（丙二醇）是多不饱和脂肪酸脂质过氧化反应的终产物，参与脂质氧化，为评估DM2患者氧化应激最常用的生物标志之一[10]。SOD（超氧化物歧化酶）则是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一，是红细胞内的一种胞浆低分子金属蛋白，能够通过还原成氧分子和过氧化氢的方式降低氧自由基，使细胞损伤减少[11] 。机体清除自由基的能力及脂质过氧化程度可通过测定两者水平反映。Vincent等通过实验发现，SOD2（锰超氧化物歧化酶）活性增高降低了DRG（背根神经节）神经元中的超氧阴离子，继而阻断Caspase-3的活化和细胞损伤，是神经元抗氧化、防御高血糖损伤的重要细胞调节因子[12]。刘春倩使用中药九虫丹治疗DPN大鼠时发现T-SOD水平增高，MAD水平降低[13];秦保峰等用补气活血中药治疗DPN患者发现SOD水平治疗后显著升高，MDA水平则显著低于正常组[14]，这与本研究结果一致。

中医认为，脾虚致消是糖尿病病机重要机理之一[15]。久食肥甘，湿热、痰浊内生，脾气不行，久则瘀滞入血，发为痰瘀、血瘀。故而，治应以祛邪化痰、运脾和络、活血化瘀为主，兼以扶正治本。运脾和络颗粒是由张仲景所著《伤寒杂病论》中的防己黄芪汤化裁而来，由苍术、黄芪、防己、当归、玄参、威灵仙、赤芍、金银花组成，具有益气活血、运脾和络、祛邪化痰的疗效。黄芪性味甘温为君，张元素[16]言其“善治脾胃虚弱，疮疡血脉不行，”起补气升阳、益气固表、利水除湿之效，配合防己祛风行水，使风湿得去，表虚得固;易白术为苍术，张隐斋[17]指出“凡欲补脾，则用白术;凡欲运脾，则用苍术”，改用苍术运脾之力尤甚;金银花、玄参、赤芍、当归凉血活血和血，威灵仙胜湿通络除痹，共奏活血化瘀之效。故全方起到活血化瘀通络、运脾除湿益气之功。

此次实验结果显示，DPN模型组的血脂代谢状况较正常组更差，评定氧化应激水平的指标SOD含量低于正常组，MDA含量高于正常组。而运脾和络颗粒能改善DPN模型血脂代谢异常状态，显著增高SOD含量和降低MDA含量，增强机体抗氧化能力，这可能是其改善DPN的作用机制之一。而不足之处是，本研究尚缺少对血脂代谢、氧化应激与DPN发生具体机制的探讨，以待学者作进一步的研究。

参考文献

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