刘针伶 黄溢泓* 全琛宇,2 李志源 周师师 覃艳然 许宗丽 马小蓉 邱 洁

1.广西柳州市动物疫病预防控制中心，广西柳州545006；2.广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室，南宁530001

口蹄疫（foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染的偶蹄动物疫病[1]。世界卫生组织将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。目前，我国仍是口蹄疫危害较为严重的国家之一，主要流行O 型和A 型口蹄疫。为控制和消灭口蹄疫，我国将其列为优先防治病种之一，采取强制免疫措施，每年投入大量的人力、物力和财力用于疫苗的采购和实施免疫[2]。为客观评价政府采购的不同厂家生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果，以及为论证是否开展猪A型口蹄疫免疫提供基础数据，以便制定科学合理的免疫程序，在柳州某猪场进行了4 种猪口蹄疫疫苗免疫效果的评估试验。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）试验疫苗。4 种试验用疫苗为A、B、C、D；A和B 为猪口蹄疫O 型灭活疫苗，C 和D 为猪口蹄疫O 型-A 型二价灭活疫苗；A、C 疫苗由J 公司生产，B、D 疫苗由Z 公司生产。

2）试验动物。由柳州某猪场提供同一批次45日龄左右健康仔猪约250 头。

3）检测试剂。口蹄疫O 型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒、口蹄疫A 型抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒，由中国兰州兽医研究所生产。

1.2 方 法

1）试验分组。免疫前进行母源抗体检测，根据检测结果挑选250 头抗体水平较低（＜6log2）的45日龄左右健康仔猪，随机分为13 个试验组。试验1A、2A、3A、1B、2B、3B、1C、2C、3C、1D、2D、3D 组 为免疫组，每组20 头猪；试验E 组10 头猪，为空白对照组。试验1A、2A、3A 组接种J 公司生产的口蹄疫O 型灭活疫苗，试验1B、2B、3B 组接种Z 公司生产的口蹄疫O 型灭活疫苗，试验1C、2C、3C 组接种J公司生产的口蹄疫O 型-A 型二价灭活疫苗，试验1D、2D、3D 组接种Z 公司生产的口蹄疫O 型-A 型二价灭活疫苗。

2）免疫程序。试验1A、1B、1C、1D 组为1 次免疫组，试验2A、2B、2C、2D 组为2 次免疫组，试验3A、3B、3C、3D 组为3 次免疫组。45日龄进行首次免疫，接种剂量为2 mL/头；首免后第28 天进行第2 次免疫，接种剂量为2 mL/头；二免后28 d 进行第3 次免疫，接种剂量为2 mL/头。对照组接种生理盐水，2 mL/头。

3）样品采集。免疫前（首免前2～3 d）采血1 次，检测口蹄疫母源抗体，首免后每隔3 周（21 d）采血1 次，直至试验结束，共采血7 次。首免后，各免疫组每次采不少于10 头猪的血样，E 空白对照组每次采不少于5 头猪的血样。采集血样按常规方法分离血清，用于抗体检测。

4）检测方法。按照检测试剂盒说明书操作。

5）结果判定。抗体效价≥6log2，判为合格；抗体效价＜6log2，判为不合格。

2 结果与分析

试验猪免疫后，均未观察到食欲减退、发烧、跛行等副反应症状。

首免后21 d，A、B 疫苗O 型抗体合格率就高于70%，达到国家规定的标准；C、D 疫苗O 型抗体效价较低，抗体合格率低于50%。首免后42 d，4 种疫苗1 次免疫组O 型抗体效价均有所下降，A、B 疫苗2 次、3 次免疫组O 型抗体效价上升至8log2～9log2，C、D 疫苗2 次、3 次免疫组O 型抗体效价总体升高，上升至6log2～8log2，4 种疫苗的O 型抗体合格率均高于90%，其中A、B、C 疫苗抗体合格率高达100%；首免后84 d，A、B 疫苗1 次免疫组O型抗体合格率均低于70%，2 次、3 次免疫组持续保持较高的O 型抗体水平及抗体合格率，C、D 疫苗各免疫组O 型抗体效价及抗体合格率总体呈较快的下降趋势。总体上看，A、B 2 种疫苗免疫后，特别是多次免疫后均能产生较好的O 型抗体保护力度，但B 疫苗的抗体保护持久性及抗体均匀度略优于A疫苗；C、D 2 种疫苗经多次免疫后能产生较好的抗体保护力度，但抗体效价持续时间短，浮动较大，相较而言，C 疫苗效果略高于D 疫苗（表1）。C、D 疫苗各免疫组A 型抗体水平的升降趋势与O 型抗体基本相同，需2 次免疫以上才能产生较好的A 型抗体保护力度（表2）。

3 讨 论

在本次试验中，选用政府招标的2 家公司生产的O 型灭活苗及O 型-A 型二价灭活苗共4 种疫苗对45日龄健康猪进行免疫接种。发现1 免21 d后，2 种O 型灭活苗抗体合格率就能达到国家规定标准，表明2 种疫苗均能较快地产生良好的抗体保护力度；2 免后，抗体效价可达8log2～9log2，抗体合格率高达100%；免疫后126 d，即171日龄时，经2免、3 免的猪群抗体效价仍保持在6log2～8log2，抗体合格率基本保持70%，表明经2 次免疫后，2 种疫苗均能产生较高的保护力度，且抗体能一直处于较高的阳性率水平。在本次试验中，2 个厂家生产的O 型疫苗免疫效果相差不大。2 种O 型-A 型二价灭活苗1 免后，O 型、A 型抗体阳性率均较低（不到50%），但2 免、3 免后能产生较好的保护力度，抗体效价能达6log2～7log2，抗体合格率达70%以上；但抗体效价持续时间相对较短，浮动较大，免疫后105 d（即150日龄时），经2 免、3 免的猪群抗体合格率略低于70%，表明这2 种疫苗产生的抗体保护持久性不足，如采用这2 种O 型-A 型二价灭活苗免疫，建议猪出栏前再进行1 次免疫。相关研究表明[3-4]，注射同种疫苗时，免疫次数越多，抗体水平和合格率越高；刘国民等[5]通过大数据监测分析建议在正常情况下，口蹄疫首免、二免间隔时间28～30 d，如猪出栏前抗体水平不佳或需压栏养体重大肥猪，则建议做三免，这与本次试验的结果相吻合。本次试验选用的4 种疫苗均能产生较好的免疫效果，但综合分析抗体产生速度、抗体保护持久性及抗体均匀度，O型灭活苗效果优于O 型-A 型二价灭活苗，其中B疫苗的效果略高于A 疫苗。

猪口蹄疫O 型-A 型二价灭活疫苗于2017年底获得新兽药证书，目前仅2 家公司获得该产品的兽药产品批准文号批件[6]。在本次试验中，选用了2种O 型-A 型二价灭活苗进行免疫，虽然免疫效果低于O 型灭活苗，但经2 免、3 免后对A 型、O 型均有一定的保护率，且O 型抗体水平相对高于A型抗体水平，这与刘国民等[5]报道的一致。据报道，近年来引起我国疫情发生的毒株均来源于东南亚国家，O 型、A 型均可通过西南通道传入我国，其中广西是高风险地区[2]。目前国内流行的A 型优势毒株，猪牛羊均可感染[7]，因此，我国仍需高度重视A型口蹄疫的感染，做好O 型口蹄疫免疫时也要重视A 型口蹄疫监测，必要时可以考虑选用O 型-A 型二价灭活苗进行免疫防控。

表1 O 型口蹄疫抗体水平及抗体合格率

表2 A 型口蹄疫抗体水平及抗体合格率