不同产地兰州百合中多糖的含量测定＊

2020-07-13韩晓霞邱国玉

甘肃科技 2020年2期

韩晓霞，李洁，邱国玉，马潇

（1.兰州食品药品检验所，甘肃兰州 730050；2.甘肃省药品检验研究院，甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室，甘肃兰州 730070）

兰州百合为百合科百合属植物兰州百合Lilium davidii Duchartre var.unicolor Cotton.的鳞茎[1]，又称甜百合，是百合科百合属川百合Lilium davidii的一个变种，属多年生草本植物，是我国四大百合品系中唯一可食用的品系，被誉为“蔬菜人参”，是一种药食兼用的品种，具有清热润肺，止咳，清心安神的功效。兰州百合中含有多种成分，如含磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、双磷脂酰甘油、溶血磷脂酰胆碱及磷脂酰醇胺[2]。干品含淀粉6.96%、蔗糖9.78%、还原糖0.65%、蛋白质4.39%、果胶4.23%、粗纤维4.10%[3]。从花中分离到β-谷甾醇、豆甾醇和大黄素成分[4]。研究证明，兰州百合中含有丰富的多糖类成分，药理研究显示：兰州百合水提醇沉物对小白鼠SO2引咳法具明显的镇咳作用；对小白鼠用酚红比色法具明显的祛痰作用；明显增加戌巴比妥钠的睡眠时间及阈下剂量的睡眠率，具明显的镇静作用；明显延长小鼠的游泳时间而具抗疲劳作用；对异丙肾上腺所致心肌耗氧增加，能延长缺氧时间[5]，因此兰州百合多糖是兰州百合主要活性成分之一。

兰州百合主要分布在兰州、定西、平凉、白银、临夏等地，以兰州市盛产而得名，虽然分布不是很广，便不同产地的兰州百合在大小、味道方面仍然存在较大的差异，其作为食品所发挥的作用远大于作为药品，同时收载兰州百合的现有标准仅有《甘肃省中药材标准》（2009年版）、《甘肃省中药炮制规范》（2009 年版）、《地理标志产品兰州百合》（DB62/T412-2014）和《甘肃省地方标准兰州百合干质量标准》（DB62/411-95），所有的标准中对其所含活性成分多糖均没有制定相应的质量控制方法，因此，作者将兰州市及周边6个主产地的兰州百合进行多糖的含量测定，旨在为兰州百合药材的质量控制评价提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Evolution300紫外-可见分光光度计，Thermo Fisher Scientific；SCG-4型智能恒温槽，宁波新芝生物科技股份有限公司；ME204/02型电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

1.2 材料

无水乙醇为分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号为20180309；硫酸为分析纯，白银良友化学试剂有限公司，批号为140212；蒽酮为分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号为2015年2月07日；D-无水葡萄糖为对照品，中国食品药品检定研究院，批号为110833-201205。兰州百合样品分别产自兰州市七里河区西果园镇、七里河区黄裕镇、七里河区魏岭乡、七里河区阿干镇、西固区金沟乡和榆中县原子岔乡青碾村，每个产区选品质不同的样品名2批，根据鳞茎大小依次编号，较大者为1#，较小者为2#，甘肃省药品检验研究院马潇主任中药师鉴定。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的配制和标准曲线的绘制

2.1.1 葡萄糖标准溶液的配制

取经105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品31.26mg（以99.5%计），精密称定，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL中含无水葡萄糖0.311037mg的葡萄糖标准溶液。

2.1.2 硫酸蒽酮试液的配制

取蒽酮0.2g，用浓硫酸溶解并稀释至100mL，临用时配制。

2.1.3 检测波长的选择

分别精密量取D-无水葡萄糖对照品和供试品溶液适量，各加水至2.0mL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8mL，混匀，放冷后置水浴中保温10min，取出，立即置冰水浴中冷却10min，取出，以相应试剂为空白。置紫外-可见分光光度计上绘制400～800nm范围内的光谱图，葡萄糖对照品在588nm±2nm有最大吸收，供试品在582nm～586nm有最大吸收，考虑到供试品中存在其他成份的干扰，故选取588nm为最大吸收波长（如图1、图2所示）。

图1 D-无水葡萄糖对照品紫外吸收光谱图

图2 供试品紫外吸收光谱图

2.1.4 标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液0.lmL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL，分别置 15mL 具塞刻度试管中，各加水至2.0mL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8ml，混匀，放冷后置水浴中保温10min，取出，立即置冰水浴中冷却10min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在588nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（X，单位：μg）为横坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为A=0.0044X+0.0173，r=0.998204（如图3所示），试验结果表明，无水葡萄糖质量在31.10～186.62μg，用0.2%蒽酮-硫酸溶液显色后的线性关系良好。

图3 无水葡萄糖标准曲线及各点对应对照品质量

2.1.5 供试品溶液的配制

取本品细粉约0.25g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150mL，置水浴中加热回流1h，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150mL，置沸水浴中加热回流1h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至200mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1mL，置15mL具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至2.0mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg)，计算，即得。