覃斐章，董 敏，秦秋华，禤霏霏，黄媛恒

1广西医科大学，南宁 530021；2南宁市第二人民医院，南宁 530031

缺血心脏在恢复血流灌注后损伤进一步加重的现象，称为心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)，常见于心脏移植、急性冠脉综合征和冠脉搭桥术后。MIRI时产生的大量自由基尤其是活性氧(ROS)不仅能直接损伤脂质、蛋白质和核酸，还能与NO、脂肪酸、Fe2+反应生成毒性物质，如ONOO-、OH-等间接损伤细胞。氧化应激水平的升高，还能激活凋亡相关蛋白，使凋亡细胞增多，与心血管重构及心力衰竭早期心肌梗死的发生密切相关[1]。

Nrf2/ARE(Nuclear factor erythroid derived 2 related factor 2/Antioxidant response element)信号通路是体内重要的抗氧化通路，在MIRI的治疗中发挥着重要的作用。Nrf2已被证实广泛分布于心脏和血管系统[2]。有研究表明，活化的Nrf2可以促进抗氧化酶的表达，清除过量的ROS，降低氧化应激诱导的心肌细胞凋亡[3]。用Nrf2 siRNA沉默其表达后，对缺氧/复氧的心肌细胞的保护作用明显减弱甚至消失，说明Nrf2的活化对心肌细胞的保护具有十分重要的作用[4]。增强Nrf2活性，还能有效的减轻糖尿病小鼠的心肌损害，延缓缺氧诱导的心肌纤维化的发展[5]。

1 材料与方法

1.1 细胞

H9c2 心肌细胞系购自中国科学院上海细胞库。

1.2 试剂与仪器

试剂：YLSC(由广西医科大学药理教研室提供，HPLC显示其纯度为98%)；ML385购自美国AbMole公司；DMEM培养基购自美国Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；MTT和胰酶购自美国Amresco公司；ROS 检测试剂盒及Annexin V-FITC/PI 双染色流式细胞凋亡检测试剂盒购自美国Invitrogen公司；细胞核蛋白和细胞浆蛋白抽提试剂盒购自上海碧云天公司；Western blot 一抗Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、Nuclear-Nrf2、HO-1、β-actin、lamin B购自美国Santa Cruz 公司；……