赵 芳，陈坤琳，邢光东，钱 勇，曹少先，李隐侠，孟春花，张建丽，张 俊，桂红兵，仲跻峰，王慧利

（江苏省农业科学院 畜牧研究所，南京 210014）

胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）是从哺乳动物囊胚内细胞团（inner cell mass，ICM）中分离出来的多能性细胞，具有无限增殖、自我更新和分化成所有主要细胞系的能力［1］。在体内，多能性是胚胎发育过程中出现的一种短暂状态；但在体外需要在培养器皿的底部铺上特殊的培养基质才能使ESCs黏附和增殖。在细胞培养基质的基础上通过补充外源性关键因子可以诱导ESCs无限期维持自我更新状态及多能性，进而开展胚胎发生、组织分化、药物筛选、疾病建模、移植治疗及转基因动物工程等科学研究［2-4］。因此，细胞外基质在ESCs培养及研发应用中意义重大。

目前，人和小鼠ESCs的培养常用饲养层细胞，如小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）或无饲养层的细胞外基质，如基质胶（Matrigel），作为细胞外基质，家畜ESCs的培养体系主要借鉴了人和啮齿动物ESCs的研究方法。MEFs饲养层的制备需经过丝裂霉素C或γ射线照射处理，而Matrigel是从Engelbreth-Holm-Swarm小鼠肉瘤中提取的，主要由层黏连蛋白、Ⅳ型胶原、硫酸肝素蛋白多糖、巢蛋白和生长因子组成。MEFs饲养层和Matrigel在制备过程中均表现出批次间的可变性［5］。在培养人或家畜ESCs时，由于MEFs和Matrigel存在异质性及批次不稳定性问题，易引发ESCs分化或癌化［6］。因此，明确培养条件、优化细胞外基质有助于更精确地探索ESCs自我更新和分化的分子基础。本试验设置了MEFs、Matrigel和 贴附因子（attachment factor，AF）3种细胞培养板，通过分析小鼠ESCs（mESCs）的形态变化、克隆集落形成及多能性调控因子的表达，综合评定3种不同处理对mESCs多能性维持的影响，为建立和优化家畜ESCs培养体系提供参考和借鉴。……