房雅玮?朱述英

摘要：目的：通过观察头孢曲松钠对小鼠肠道菌的影响，为指导临床合理用药提供数据支持。方法：对实验动物予以不同剂量头抱曲松钠灌胃，每天两次，连续四天，实验第28天取盲肠内容物检测大肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌的菌落数。结果：实验组小鼠肠道内4种细菌的数量明显改变，其中大肠杆菌、肠球菌数量明显增加，而乳酸杆菌和双歧杆菌明显减少，表示肠道内正常菌群的平衡遭到破坏，形成了菌群失调。结论：长期使用抗生素可使肠道中厌氧菌数量骤减或消失，其抗感染和调节肠菌群等作用随之减弱或消失，需氧菌或兼性厌氧菌数量增加使肠道菌群发生了量和质的变化。

关键词：过量;抗生素;肠道微环境

1 引言

抗生素于20世纪40年代首次现身时，被人们惊呼为“神药”，对感染性疾病治愈率较高，近年来广泛应用于临床。随着抗生素的广泛应用，其不良反应越来越受到人们的重视。在众多不良反应中，抗生素相关性腹泻（antibiotic-as-sociated diarrhea，AAD）相对普遍和严重。普遍认为AAD的发生与肠道菌群失调有关，这主要见于长期应用广谱抗生素治疗的患者，其体内对抗生素敏感的细菌被大量杀灭，而不敏感的细菌，如金葡菌、白色念珠菌等则乘机繁殖，引起假膜性肠炎、白色念珠菌性肺炎等，这些疾病临床上也称二重感染。

本实验通过观察头孢曲松钠对小鼠肠道菌的影响，为指导临床合理用药提供数据支持，减少患者的内源性感染。

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

厌氧菌基础培养基（用于稀释粪便标本），伊红美蓝琼脂培养基（用于选择大肠杆菌），麦康凯琼脂培养基（用于选择肠球菌），乳酸杆菌选择性琼脂培养基（用于选择乳酸杆菌），双歧杆菌培养基（用于选择双歧杆菌）;头抱曲松钠（商品名罗氏芬）（上海罗氏制药有限公司出品）;lml注射器（青岛兰威生物制品公司生产）;普通级纯系雄性昆明小鼠（购于青岛市试验动物与动物实验中心，许可证：SCXK（鲁）20030010）。

2.2 实验仪器设备

电子天平：德国Mettler公司PM460

超净工作台：苏州净化设备公司

电热恒温箱：上海国光医化仪器厂

2.3 实验方法

2.3.1 造模及给药

30只小鼠适应10天后，将动物分为三组，分别是正常对照组10只，实验低剂量组10只，实验高剂量组10只，对两个实验组动物予以头抱曲松钠灌胃，每天两次，连续四天，对照组动物给予生理盐水灌胃。低、高剂量分别是每千克动物给药500mg、1000mg。

实验第28天，颈椎脱臼法处死全部动物。

2.3.2 样品收集

上述各组小鼠处死后，在无菌条件下剖检，均取盲肠内容物检测4种细菌的菌落数。取盲肠内容物置于无菌含玻璃珠的小瓶内，加一定倍数的稀释液后在振荡器上振荡15min，使样品呈均质状。然后连续10倍稀释（10-2～10-7），选二个稀释度用滴注法分别接种于伊红美蓝琼脂培养基（EMS）、麦康凯琼脂培养基、乳酸杆菌选择性培养基、双歧杆菌培养基上，7℃培养72h，然后观察结果。

2.4 统计学处理

采用SPSS22.0统计软件对以上检测所得数据进行统计处理，各组数据均采用“均数±标准差（）”的形式表示，用t检验进行分析。

3 实验结果与分析

3.1 小鼠表观特征观察

正常对照组小鼠摄食饮水正常，行动活跃，被毛平整光滑。各实验组小鼠摄食下降，行动迟缓，皮毛失去光泽。

3.2 肠道菌群的变化

如表1所示，与正常对照组小鼠肠道菌群比较，实验组小鼠给药后，小鼠肠道内4种细菌的数量明显改变，其中大肠杆菌、肠球菌数量明显增加，而乳酸杆菌和双歧杆菌明显减少，表示肠道内正常菌群的平衡遭到破坏，形成了菌群失调。

4 讨论

胃肠道的正常菌群构成了一道抵御外界病菌入侵的天然屏障，对人体的健康有重要意义。微生物种群的生物拮抗作用，是维持微生态平衡所必需的。正常情况下，肠道菌群保持相对稳定，以厌氧菌为主的肠道原籍菌与肠粘膜紧密粘附，产生定植抗力（Colonizationresistanee，CR），并借助于固有的肠粘膜屏障和肠道内的杀菌物质及免疫系统，共同防止外籍菌的粘附和定植，维持肠道内微生态环境的平衡。正常肠道内环境是一种厌氧、PH及氧化还原电势（Eh）较低的状态，有利于厌氧菌和兼性厌氧菌大量繁殖，而过路菌、外袭菌在肠道内定植、繁殖受到抑制和拮抗。特别是双歧杆菌和乳酸杆菌是肠道内的重要生理菌，通过营养争夺、产生各种有机酸降低肠道局部PH，产生具有广谱抗菌作用的物质如亲脂分子（1ipophiliemoleeuzes）、小菌素（mieroesn）、过氧化氢等，对肠道内的潜在致病菌起抑制或杀灭作用，在正常情况下能发挥生物屏障与拮抗作用。现已明确，以双歧杆菌、乳酸杆菌为主的专性厌氧菌定植于肠粘膜上皮，能阻止条件致病菌（多为G一杆菌与球菌）对肠粘膜的戮附和定植，具备所谓的定植抗力，是防止细菌或（和）内毒素易位进而发生肠源性感染的重要因素。

5 结论

长期使用抗生素可使肠道中厌氧菌数量骤减或消失，其抗感染和调节肠菌群等作用随之减弱或消失，需氧菌或兼性厌氧菌数量增加，肠道内含氧量升高，即有利于外袭菌的定植、繁殖。随着用药时间的延长，小鼠肠道的双歧杆菌和乳酸杆菌数量也随之下降，肠道菌群发生了量和质的变化。

参考文献：

[1] 熊德鑫.现代微生物学[M].北京：中国科学技术出版社，2000.

[2] 丁秀芹菜.抗生素的过量使用与细菌耐药性关系研究[J].中国医药导报，2011（29）.

指导老师：朱述英（1983—），女，山东滕州人，硕士，副教授，研究方向：中药药理学。

（作者單位：山东协和学院）