尹思成?朱述英

摘要：目的：研究不同时期采收的大青叶中靛玉红含量差异，确定大青叶的最佳采收时间。方法：采用高效液相色谱法测定不同采收期的大青叶中靛玉红含量。结果：不同生长时期的大青叶中靛玉红存在一定差异，以7月上旬采收的大青叶中靛玉红的含量最高。结论：7、8月份采收的大青叶质量较好，以7月上旬采收时间为最佳。

关键词：采收期;大青叶;质量

大青叶（IsatistinctoriaL.），味苦，性寒;归肝、胃经;具有清热解毒，凉血消斑之功效，用治温病发热，发斑，风热感冒，咽喉肿痛及丹毒，流行性乙型脑炎、肝炎和腮腺炎等症。现代药理研究发现其具有抗菌抗病毒、抗钩端螺旋体、解毒、提高免疫、抗肿瘤、对抗白血病等作用。而靛玉红是其主要的活性成分，因此测定靛玉红的含量对于研究大青叶的质量起着至关重要的影响。

许多研究表明，中药材不同采收时节期限，对其内含药效物质有一定影响，叶类药材多在植物生长旺盛期，开花前或果实成熟前采收。大青叶的传统采收为夏秋2季分2次～3次采收叶片，除去杂质，晒干。本项目对校内种植的大青叶资源分三次采收，通过测定大青叶中靛玉红的含量差异来确定最佳采收时期。

1 实验条件与方法

1.1 实验仪器设备

高效液相色谱仪（LC-10ATvp型，日本岛津）;精密电子天平（METTLER TOLE-DO AG204型，瑞士）;TAS-986原子吸收分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）;优普纯水机（UPT-II-10T）。试剂：氯仿（AR级，天津化学试剂厂），色谱甲醇（美国Fisher公司），水为纯化水。

1.2 实验方案

1.2.1 采收与加工

7月上旬苗高18～20 cm时可收割一次叶子，割时留茬3～5 cm，之后于8月中旬、10月中旬待苗重新生长可再分布割一次。割取的大青叶阴干。

1.2.2 薄层层析

取7月、8月和10月采摘的大青叶粉末各约0.5g，加氯仿20mL，加热回流1h，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液。另取靛玉红和靛蓝对照品，加氯仿制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮（5：4：1）为展开剂，上行展开10cm，取出，晾干。

1.2.3 靛玉紅含量测定

（1）色谱条件：色谱柱为ALLsphereODS-2（4.6mm×250mm，5μm）不锈钢色谱柱，流动相为甲醇-水（75∶25），检测波长为289nm，流速为1mL/min，室温。理论板数按靛玉红峰计算大于4000。

（2）对照品溶液的制备：精密称取靛玉红对照品5mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，配制成50μg/mL的标准液作为原液。准确移取原液2.5mL、2mL、1mL、2mL分别加入5mL、5mL、5mL、25mL的容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，配制成25μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、2μg/mL的对照品溶液。

（3）供试品溶液的制备：精密称定7月、8月和10月大青叶粉末分别为0.5000g，0.4999g，0.5001g，置索氏提取器中，加三氯甲烷100mL，浸泡12h，加热回流6h，至提取液无色，回收溶剂至干。残渣中加甲醇使溶解并转移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。

（4）系统适用性试验：在“1.2.3.1”的色谱条件下，精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪进行试验。

2 实验结果与分析

2.1 薄层扫描

通过薄层色谱图比较，三次采收药材在靛玉红对照品的相同位置上均有相同颜色斑点，10月大青叶斑点明显浅于7、8月大青叶，7月与8月的颜色差别不大。

2.2 系统适用性试验结果

由图1可知，靛玉红峰形良好，分离效果好。

2.3 靛玉红含量

7、8、9月采收的大青叶中靛玉红的含量分别是2196μg/g、1918μg/g、1347μg/g。

4 结论

通过对不同采收期大青叶中靛玉红的含量测定比较，结果表明采收期对大青叶中主要药效成分靛玉红的含量具有明显的影响。7、8月份采收药材靛玉红的含量远高于10月采收，其中7月上旬采收质量最好。国内大部分资料记载大青叶的传统采收期为夏秋2季，分2～ 3次采收叶片，除去杂质、晒干。在北方，6月下旬苗高18～ 20cm时可收割1次叶子，割时留茬3～ 5cm，待苗重新生长可再割1次叶，气候温暖地区，每年可收叶3次。但从靛玉红累积含量的角度分析，大青叶的采收时间以7月上旬为最佳时机。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中国人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 牟玉杰，王春艳.菘蓝的栽培、采收和加工[J].林业实用技术，2003（03）.

基金项目：山东协和学院2019年度大学生实验室开放项目“常见中药材基原鉴定研究”（编号：2019SYKF03）。

指导老师：朱述英（1983—），女，山东滕州人，硕士，副教授，研究方向为中药药理学。

（作者单位：山东协和学院）