杨小英， 张 浩， 张宇馨， 党宏万， 王欣瑜

（1.宁夏医科大学总医院药剂科，银川 750004； 2.宁夏医科大学总医院临床药理研究室，银川 750004）

华法林是香豆素类口服抗凝药，目前被广泛应用于多种疾病的抗凝治疗，但其维持剂量个体间和民族间差异很大，剂量很难掌握。其靶酶——维生素K 环氧化物还原酶复合体亚单位1（VKORC1）基因突变对华法林剂量的影响可达25%[1]。民族因素对华法林剂量的影响与其他区域、其他民族研究结果是否一致有待研究。鉴于此，本研究对宁夏地区回族人群中VKORC1 基因rs9923231 位点基因型进行检测并分析其分布频率及特点，旨在为今后本地区华法林个体化治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

随机选取来自宁夏医科大学总医院2015 年6 月至9 月的健康回族体检者304 例，其中男性145 例，年龄19～80 岁，平均（49.41±14.59）岁；女性159 例，年龄19～79 岁，平均（46.83±14.39）岁，均为宁夏地区居民，相互之间无亲缘关系，所有基础信息由医院体检办获得。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA 的提取 外周静脉血200 μL，用血液基因组DNA 快速抽提试剂盒［生工生物工程（上海）股份有限公司，SK8224］抽提DNA，严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.2 引物的设计与合成 引物设计参照有关文献，上游引物为rs9923231-F： 5'-CCC AAA ATG CTA GGA TTA TAG GC-3'，下游引物为rs9923231-R： 5'-TTC ACA AGT TCC AGG GAT TCA-3'。由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.2.3 PCR 扩增与基因测序 PCR 反应体系体积为25 μL，模板DNA 0.5 μL，10 μmol·L-1引物F 0.5 μL，10 μmol·L-1引物R 0.5 μL，10 mmol·L-1dNTP 0.5 μL，10×Taq Buffer 2.5 μL，25 mmol·L-1MgCl22 μL，5 U·μL-1Taq 酶0.2 μL，H2O 18.3 μL。PCR 反应条件为：95℃预变性3 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35 个循环；72℃修复延伸8 min。1%琼脂糖电泳观察PCR 产物，PCR 产物使用纯化回收试剂盒［生工生物工程（上海）股份有限公司，SK1141］纯化后，使用ABI-3730XL 基因分析仪进行测序。……