张油兵，牛王翠，张洪铭，夏长秀，李梦媛，娄 伟，陈兆星，严 翔

（赣州市柑桔科学研究所，江西赣州 341000）

赣南脐橙园内健康树上挂有枯枝，而枯枝表层含有多种微生物，如果清理不及时，在病健交界处，枯枝上的致病菌势必会通过农事活动、雨水、刮风等感染健康枝，进而影响树的生长势。赣南地区近年来柑桔黑点病发生严重，据报道，在管理良好，枝干树脂病不发生或发生很轻的果园，黑点病侵染来源主要来自枯死枝梢上的分生孢子[1]；炭疽病是严重危害农作物生产和农产品储运的一大真菌性病害，具有危害广和危害时间长的特点，主要侵害农作物叶片、枝条、花、果实和果柄，常造成大量落叶、枝条枯死、落花、落果和果实腐烂[2]。本研究旨在从枯枝上分离出菌并进行鉴定，及时了解不同季节枯枝上的病原菌，有针对性地进行提前防治，减少柑桔的发病率。

1 材料与方法

1.1 试验材料

分离材料选取赣州市柑桔所内脐橙果园的枯枝，采用PDA 培养基进行培养筛选菌株，其成分为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15g（1L）。

1.2 试验方法

采用五点取样法，于4月份及8月份从果园内采集枯枝，并立即送实验室进行处理：剪取枯枝的一小段，置入含有灭菌水的培养皿中，浸泡清洗2～3min，吸取培养皿中的洗涤水30uL 到固体PDA 培养皿中，涂平板，之后放入28℃人工恒温培养箱中培养2～3d，随后用牙签挑取培养皿中的单菌落至固体PDA 培养皿中，放入28℃人工恒温培养箱中培养2～3d，观察单菌落的外观形态，并将样品送到南昌科畅生物科技有限公司进行鉴定菌的种属关系，并进行系统性的分类。

2 结果与分析

2.1 外观形态学观察

图1 4月份筛选的菌株

将分离到的菌株在PDA 培养基中进行划线培养3d 后，从外观形态进行观察（见图版），筛选到的Ap1-1 和Au4-3在基质上菌丝体呈现灰绿色，菌落灰色；Ap1-2和Au3-1 呈乳白色，翻开培养皿盖子有股恶臭味，无菌丝体；Ap4-2 呈粉红色，无菌丝体；Au1-1 菌丝体白色，菌落雪白，边缘褶痕状；Au4-4 菌落外观呈黄色，无明显菌丝体。

图2 8月份筛选的菌株

图3 Ap4-2进化树

图4 Ap1-2进化树

图5 Au4-4进化树

2.2 菌的种属鉴定

将挑取的单菌落送到南昌科畅生物科技有限公司进行测定16SrDNA 序列，通过构建进化树分析菌的种属关系，针对细菌菌株Ap1-2、Ap4-2 和Au4-4进行构建进化树，如图3～5 所示。

3 结论与讨论

赣南脐橙园内的枯枝表层含有的微生物群落依不同的季节、不同的生态环境，分布情况不一样；本研究结果表明，4月份共筛选获得3 株单菌株，分别为Ap1-1（枝状枝孢菌）、Ap1-2（短小杆菌属）和Ap4-2（甲基细菌），8月份筛选出4 株单菌株，分别为Au1-1（裂褶菌）、Au3-1（短小杆菌属）、Au4-3（枝状枝孢菌）和Au4-4（鞘氨醇单胞菌属）；4月份和8月份均筛选出了枝状枝孢菌和短小杆菌属的菌株。

赣南地区一般在脐橙采摘完后，进行果园的清理，往往这个时候，枯枝上的致病菌很可能已经感染了健康的枝条或果面，及时了解不同季节枯枝上的病原菌，有针对性地进行提前防治，以减少果园的打药次数，减少发病率等，显得尤为重要。枯枝菌的分离鉴定及防治研究能够很好地为赣南柑橘产区从源头上防治病害提供理论依据及技术支撑，对于稳定柑桔产区的经济效益具有重大意义。