林艳丽, 李鲁汉, 廖辉, 覃建兵, 伍翔 王岩岩, 吴端阳, 张鸿杰, 柳忠玉 (长江大学生命科学学院, 湖北 荆州 434025)

虎杖(PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.)是蓼科多年生药用草本植物，药用历史悠久。本课题组通过RT-PCR和RACE技术从虎杖中获得了1个新的MYB转录因子，命名为PcMYB1。MYB转录因子是最大的植物转录因子家族成员之一[1, 2]，该转录因子广泛存在于植物中，拟南芥中至少包含208个MYB转录因子。根据保守序列结构和功能的不同，MYB转录因子可以划分为28个亚家族[3]。该类基因具有重要的生物学功能，可调控植物生长发育和器官的模式建成，参与多种植物逆境防御反应和植物次生代谢调控[4, 5]。若要对PcMYB1基因在虎杖中mRNA水平的表达进行定量检测，从而进一步研究该基因的功能，就需要一种能准确定量的检测方法。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法简便准确，已经广泛用于多种基因的检测与表达分析[6, 7]。该研究根据虎杖PcMYB1基因序列设计特异引物，PCR扩增PcMYB1基因，亚克隆于pUC19载体中后，测序鉴定并制备重组质粒，试图建立一套标准的qRT-PCR方法，为进一步研究PcMYB1基因在虎杖中的功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

野生型虎杖植株种植于长江大学苗圃；大肠杆菌菌株DH5α、pUC19载体质粒由笔者所在实验室保存；cDNA第一链合成试剂盒和胶回收试剂盒购自Tiangen公司；荧光定量试剂盒购自Monad公司；限制性内切酶、Taq DNA聚合酶、T4连接酶购自TaRaKa公司。

1.2 方法

1.2.1 总RNA提取和cDNA的合成

取虎杖叶片使用Trizol试剂裂解细胞并按照说明书提取细胞总RNA。利用核酸浓度测定仪测定总RNA浓度、检测RNA溶液在260nm和280nm波长下的光密度并读取两者比值(D260/280)，通过琼脂糖凝胶电泳确定提取的总RNA的完整性。……