梅小伟 欧阳燕 谭涛

摘要：为了查明湖南省某猪场保育猪厌食、发烧、咳嗽、皮肤发绀致保育猪死亡的原因，采用临床症状观察、现场剖检及实验室PCR检测等方法，结果表明，送检病死保育猪发病是由猪繁殖与呼吸综合征类NADC-30毒株和HP-PRRSV毒株及猪圆环病毒2型混合感染，继发细菌性疾病，应采取相应的治疗及预防措施，降低该病造成的损失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征;NADC-30;HP-PRRSV;PCV-2;继发感染

中图分类号：S858.28        文献标识码：A        文章编号：1007-273X（2020）03-0005-02

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）主要以妊娠母猪发生明显的繁殖障碍以及仔猪出现严重的呼吸系统疾病和生长迟缓为主要特征，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起一种严重危害全球养猪业的病毒性传染病。尤其是2006年由高致病性PRRSV（HP-PRRSV）引发的猪“高热病”给我国养猪业造成了沉重的打击。2009年、2011年和2015年PRRS在我国都出现不同程度的暴发。此外，2015年来自美国的NADC-30 like毒株在我国不同省份引发母猪严重的流产或早产[1]。猪圆环病毒病在我国广泛流行，给猪场造成了严重损失，该病是由圆环病毒2型引起，主要表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征，临床上断奶仔猪最易感（6～15周龄），发病率4%～30%，死亡率50%～90%[2]，其主要临床症状为生长发育缓慢、食欲减退、体重渐进性下降、消瘦、贫血、黄疸、呼吸困难以及腹泻等[3]。保育猪由于感染了猪蓝耳病毒及圆环病毒等免疫抑制性疾病，往往容易继发猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病等细菌病，从而导致更大的损失。笔者对发病仔猪通过发病过程的了解、现场解剖及实验室检测最终确诊为猪繁殖与呼吸综合征类NADC-30毒株和HP-PRRSV毒株及PCV-2共感染，继发细菌性疾病，现将诊断过程报道如下。

1  发病情况

湖南省某猪场母猪存栏400头左右，保育猪（40日龄）开始发病，死亡率达20%以上。主要临床症状为厌食、发烧、咳嗽、皮肤发绀、消瘦、关节肿大等症状。发病后该猪场用氟苯尼考、金霉素、土霉素等药物拌料进行治疗，未见好转。

2  剖检变化

现场剖检病猪，主要表现为下颌淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结明显肿大，肺脏肿胀，呈褐红色花斑状。心包积液，腹腔积液，肝脾肿大与腹腔粘连。

3  实验室检测

3.1  PRRSV的检测

3.1.1  RNA的提取  采集病死猪的肺脏及淋巴结，取样适量匀浆器研磨10 min后收集勻浆，12 000 r/min离心10 min，取上清液200 μL于DEPC处理过的1.5 mL EP管中，然后按照相关操作说明提取病毒RNA，提取的RNA可小量分装于-80 ℃低温保存备用。

3.1.2  两步法RT-PCR  第一步：cDNA的合成。将表1体系与第一步反应体系混匀，反应条件为42 ℃ 30 min，99 ℃ 5 min，5 ℃ 5 min。合成好的cDNA立即用于第二步PCR反应（表2）。

第二步：特异性DNA片段的合成。得到的PCR产物经过琼脂糖电泳分离后，用凝胶成像系统拍照记录。结果病料中检测出NADC-30 like PRRSV与HP-PRRSV共感染（表3、图1）。

3.2  PCV-2的检测

3.2.1  DNA的提取  采集病死猪的肺脏及淋巴结，适量取样匀浆器研磨10 min后收集匀浆，12 000 r/min离心10 min，取上清液200 μL于DEPC处理过的1.5 mL EP管中，然后按照相关操作说明提取病毒DNA，提取的DNA可小量分装于-80 ℃低温保存备用。

3.2.2  PCR扩增  得到的PCR产物经过琼脂糖电泳分离后（表4），用凝胶成像系统拍照记录。结果病料中检测出PCV-2（表5、图2）。

4  诊断

根据现场观察、临床剖检及实验室检测，确诊该猪场送检患病猪为NADC-30 like PRRSV、HP-PRRSV与PCV-2共感染，同时继发细菌性疾病。

5  措施

对已发病猪，每吨饲料添加替米考星2 000 g+磺胺氯哒嗪钠400 g，连续饲喂15 d，降低因为继发细菌性疾病导致的死亡。由于该猪场出现了蓝耳的2种毒株及与圆环的共感染，对未断奶仔猪加强对圆环的免疫，建议疫苗加大剂量到2头份，断奶后每吨饲料立即添加替米考星2 000 g+磺胺氯哒嗪钠400 g，连续饲喂15 d。

6  讨论

当前，猪蓝耳病和圆环病毒病仍然是困扰猪场的最主要的疾病，由于猪蓝耳病病毒具有高度变异性，当前的蓝耳病毒疫苗接种对疫病的防控很难达到满意的效果，且因为滥用疫苗，导致我国部分猪场出现PRRSV不同毒株共感染的情况。另外从临床检测来看，NADC-30 like PRRSV有逐渐扩大的趋势。因此，猪场应慎重选用高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫接种，田克恭[4]认为对于疫情相对稳定的猪场，一般不推荐使用高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗。周磊等[5]认为采用生物安全控制措施、闭群技术、后备母猪驯化、PRRSV检测与淘汰等综合措施，是防控 PRRS的明智之举。PCV-2引起的猪圆环病毒病目前尚无有效的治疗措施，而且PCV-2对外界抵抗力强，猪场净化难度高。疫苗接种仍然是当前防控该病的最有效的手段之一。

通过对该猪场的现场考察，解剖及相关实验室检测，最终找到了该猪场出现保育猪高死亡的原因，通过使用替米考星+磺胺氯哒嗪钠的组合控制继发感染，同时加强圆环疫苗的免疫，取得了显著效果，下一批保育猪的死亡率明显降低，不到5%。而对已发病猪使用该药物组合，死亡率稍有降低，未有明显改善，可能受圆环病毒的影响，导致发病猪死亡，也降低了机体的免疫力及抵抗力，因此在断奶前一定要做好圆环疫苗的免疫工作。

参考文献：

[1] 张洪亮，张  晶，李  真，等.2016年我国部分地区类NADC30新亚群猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析[J].中国预防兽医学报，2016，38（9）：675-680.

[2] 周绪斌，许秀梅，张馨玉.猪圆环病毒疫苗的研究进展[J].中国兽医杂志，2007，43（4）：47-49.

[3] 王忠田，杨汉春，郭  鑫.猪圆环病毒研究进展[J].中国兽医杂志，2004，40（3）：33-35.

[4] 田克恭.高致病性蓝耳病的流行历程及趋势分析[J].今日养猪业，2012（2）：51-52.

[5] 周  磊，杨汉春，姜  平，等.猪繁殖与呼吸综合征综合防控技术及应用[J].中国畜牧杂志，2015，51（6）：62-67.