胡玉荣

(内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028007)

脑卒中是神经系统的常见病、多发病。其发病率、死亡率及致残率均较高，是目前导致人类死亡的三大主要疾病之一。蒙医学认为脑卒中属于蒙医白脉病范畴，命名为“萨病”[1]。蒙成药额日敦-乌日勒是治疗脑卒中的主方，而且有相关研究分析了蒙成药额日敦-乌日勒治疗脑卒中的机制[2]。本研究采用改良Zea-longa法，建立大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)[3]，观察蒙成药额日敦-乌日勒对脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器材料

额日敦-乌日勒(内蒙古民族大学附属医院M14060733M)，血塞通片(Z53020181)，Wistar大鼠144只(辽宁长生生物技术股份有限公司)，线栓(广州佳灵生物技术有限公司)，水合氯醛(国药集团)，大鼠IL-6、IL-1β ELISA试剂盒(货号分别为JM-01597R2、JM-02323M1)由江苏晶美生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 脑缺血再灌注损伤大鼠模型的构建 选取144只体质量为180～240 g健康雄性Wistar大鼠(山东中医药大学动物中心提供，动物合格证号：SCXK鲁20110007)，经适应性饲养1周后开始造模，实验前禁食12 h，自由饮水。采用改良Zea-longa法，实行左侧MCAO手术。即将线栓插入颈内动脉直至颅内大脑前动脉的近端，有阻力出现时即可停止插线(深度约18～20 mm)，结扎ICA的插线处以阻断血流，造成脑缺血。90 min后将线栓稍稍向外拔出，实现再灌注。假手术组除不插入线栓外其余操作同模型组，自由摄食饮水。

1.2.2 动物分组 造模成功之后将144只大鼠随机分成5组：假手术组24只、模型组24只、治疗组72只(额日敦-乌日勒高剂量组每个时间点8只，额日敦-乌日勒中剂量组每个时间点8只，额日敦-乌日勒低剂量组每个时间点8只)、对照组24只。

1.2.3 给药方法 造模24 h后开始灌胃给药。额日敦-乌日勒高剂量组给予500 mg/kg，额日敦-乌日勒中剂量组给予250 mg/kg、额日敦-乌日勒低剂量组给予125 mg/kg，对照组给予血塞通片236.25 mg/kg。假手术组、模型组Wistar大鼠每日1次灌胃纯净水。

1.2.4 大鼠神经行为学评分方法 使用Bederson神经行为损伤评分标准对大鼠进行神经行为学评价[4]，评分内容包括：0级：无神经功能缺损症状，0分；Ⅰ级：提尾时对侧肢体屈曲内收(即提尾悬空实验阳性)，1分；Ⅱ级：一侧推抵抗力下降(即侧推力实验阳性)并有Ⅰ级症状，2分；Ⅲ级：自由活动时间向瘫痪侧划圈并有Ⅱ级症状，3分；Ⅳ级：意识丧失，不能行走，4分，满分4分。

1.2.5 动物取材 分别再灌注1、3、7天给药后，按照300 mg/kg 10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，待大鼠麻醉后，行神经功能评分、心脏取血，3 000 r/min离心20 min后提取血清，-20 ℃冰箱冻存，速取出脑组织，于冰上迅速分离出缺血侧皮层脑组织，分别装入冻存管中，放入液氮中速冻2 h后，保存于-80 ℃。

1.2.6 检测指标 按ELISA试剂盒说明书测定血清和脑组织中IL-6、IL-1β的含量。

1.3 统计学处理

2 实验结果

2.1 蒙成药额日敦-乌日勒对大鼠神经行为学的影响

采用Bederson神经功能缺损评分法对大鼠展开神经行为学评价。实验结果显示模型组动物在造模之后，其神经行为学的评分显著高于假手术组(P<0.05)，表明脑缺血再灌注造成神经功能障碍的作用明显；分别再灌注7天给药后，治疗组、对照组神经功能评分显著低于模型组(P<0.05)，提示蒙成药额日敦-乌日勒可提高脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能。见表1。

表1 额日敦-乌日勒对大鼠神经行为学的影响 (分，

注：与假手术组相比，*P<0.05；与模型组相比，**P>0.05，#P<0.05。

2.2 蒙成药额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注1、3、7天血清及脑组织中IL-6、IL-1β的影响

实验结果显示：wistar大鼠大脑中动脉阻塞再灌注1天模型组与假手术组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显升高，具有显著统计学意义(P<0.01)。额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比无明显差异(P>0.05)。wistar大鼠大脑中动脉阻塞再灌注3天模型组与假手术组相比，血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显升高，具有显著统计学意义(P<0.01)；额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比，血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显降低，具有显著统计学意义(P<0.01)。额日敦-乌日勒低剂量组和中剂量组与血塞通组相比无明显差异(P>0.05)；额日敦-乌日勒高剂量组与血塞通组相比，血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显降低，具有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。wistar大鼠大脑中动脉阻塞再灌注7天模型组与假手术组相比，血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显升高，具有显著统计学意义(P<0.01)；额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比明显降低，具有显著统计学意义(P<0.01)。额日敦-乌日勒低剂量组和中剂量组与血塞通组相比无明显降低(P>0.05)；额日敦-乌日勒高剂量组与血塞通组相比，血清、脑组织IL-6，IL-1β含量明显降低，具有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。见表2、表3、表4、表5。

组别IL-1β脑组织1天3天7天假手术组30.36±2.5529.93±1.3527.49±4.25模型组53.13±3.33#52.61±4.30#47.69±1.16#血塞通组53.56±6.11∗∗40.25±6.60∗36.11±1.81∗额日敦-乌日勒低剂量组52.95±6.63∗∗35.23±4.67∗△34.00±3.52∗△额日敦-乌日勒中剂量组51.32±2.95∗∗34.99±5.43∗△33.48±5.35∗△额日敦-乌日勒高剂量组50.22±5.07∗∗32.55±4.40∗○30.90±2.95∗▽

注：与假手术组相比，#P<0.01；与模型组相比，**P>0.05，*P<0.01；与血塞通相比，△P>0.05，▽P<0.01，○P<0.05。

组别IL-1β血清1天3天7天假手术组27.75±2.5729.50±4.1929.71±3.16模型组57.69±2.37#55.63±6.39#46.56±2.65#血塞通组56.51±6.55∗∗41.73±5.91∗37.08±4.36∗额日敦-乌日勒低剂量组56.59±2.53∗∗36.34±4.81∗△34.13±3.49∗△额日敦-乌日勒中剂量组55.56±4.62∗∗35.29±6.20∗△32.87±3.75∗△额日敦-乌日勒高剂量组53.99±5.59∗∗33.19±6.30∗○30.87±5.32∗○

注：与假手术组相比，#P<0.01；与模型组相比，**P>0.05，*P<0.01；与血塞通相比，△P>0.05，▽P<0.01，○P<0.05。

组别IL-6脑组织1天3天7天假手术组105.21±6.53112.12±16.16106.37±6.78模型组159.48±14.08#200.52±22.43#183.85±15.16#血塞通组154.06±6.47∗∗161.43±13.45∗150.17±7.94∗额日敦-乌日勒低剂量组156.64±6.77∗∗157.88±8.31∗△149.99±8.27∗△额日敦-乌日勒中剂量组153.89±4.81∗∗154.14±8.61∗△145.10±6.80∗△额日敦-乌日勒高剂量组148.69±9.03∗∗149.09±8.90∗○137.66±5.96∗▽

注：与假手术组相比，#P<0.01；与模型组相比，**P>0.05，*P<0.01；与血塞通相比，△P>0.05，▽P<0.01，○P<0.05。

组别IL-6血清1天3天7天假手术组103.79±4.90105.76±6.58108.81±4.34模型组150.93±12.90#184.85±10.85#163.00±9.78#血塞通组144.55±6.67∗∗147.73±9.95∗135.06±7.26∗额日敦-乌日勒低剂量组142.19±11.64∗∗145.60±9.17∗△133.77±5.84∗△额日敦-乌日勒中剂量组145.67±6.35∗∗141.66±10.13∗△128.60±6.10∗△额日敦-乌日勒高剂量组150.76±3.13∗∗133.08±3.22∗▽111.89±2.84∗▽

注：与假手术组相比，#P<0.01；与模型组相比，**P>0.05，*P<0.01；与血塞通相比，△P>0.05，▽P<0.01，○P<0.05。

3 讨论

蒙医学脑卒中属于蒙医白脉病范畴，命名为“萨病”。蒙医学认为萨病是“因众多外因所致体内三根(赫依、协日、巴达干)失调，赫依与奇素相搏引起脑-白脉之海受损而导致发病”。蒙成药额日敦-乌日勒是治疗萨病的主方，临床疗效显著，且毒副作用小。《中华人民共和国卫生部药品标准》中记载额日敦-乌日勒由珍珠(制)20 g，红花15 g，石膏、栀子、降香、草果仁、海金沙、诃子、沉香、川楝子、白豆蔻、枫香脂、檀香各15 g，决明子、土木香、方海、肉桂、丁香、木香、地锦草、肉豆蔻、苘麻子、甘草、白巨胜、荜拨、黑种草子各10 g，牛黄5 g，麝香0.5 g，水牛角浓缩粉30 g等二十九味药物组成。本方性凉，以镇静及医治白脉之良药珍珠为主[5]。研究表明额日敦-乌日勒在防治缺血性脑血管病、脑出血、高血压合并脑出血、面瘫等疾病方面的临床疗效显著[6]，具有抑制炎症反应、抗动脉粥样硬化形成、发展和稳定易损斑块的作用[7]，清除和抑制自由基，能明显抑制异常增高的白细胞聚集，还有明显的降脂等作用[8]。

现代医学表明，脑梗死过程中炎症反应促进了脑缺血损伤的发展，是加重缺血性脑损伤和神经损伤的重要病理机制之一[9]。脑缺血损伤后在缺血受损区有细胞因子的过量表达和炎性细胞浸润，过量炎症因子的产生可加重神经细胞损伤[10]。IL-6具有广泛的生物学活性，是一种单链蛋白细胞因子，在免疫和炎症反应中发挥着重要作用。在细胞缺血时，IL-6可小胶质细胞和神经元合成IL-6，而IL-6表达水平的高低是衡量CIRI程度的重要指标[11]。

IL-1(IL-1a、IL-1β)的来源十分广泛，脑缺血后由活化的星形细胞、少突胶质细胞及浸润的巨噬细胞分泌，可促进内皮细胞表达黏附分子，从而加重局部炎性反应。研究表明，大脑中动脉栓塞模型大鼠脑组织中IL-1β水平6h开始增高，24 h达到高峰，说明IL-1β参与了脑缺血再灌注损伤后的炎性反应[12]。尤其是 TNF-a、IL-1β、IL-6等细胞因子[13-14]过度释放，致使血脑屏障受损，加重脑损伤及脑水肿，形成缺血炎症恶性循环。

本研究表明wistar大鼠大脑中动脉阻塞再灌注1、3、7天模型组与假手术组相比，血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显升高，具有显著统计学意义(P<0.01)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比，血清、脑组织IL-6，IL-1β含量明显降低，具有显著统计学意义(P<0.01)。再灌注3、7天尤其是额日敦-乌日勒高剂量组与血塞通组相比，血清、脑组织IL-6，IL-1β含量明显降低，具有统计学意义(P<0.01，P <0.05)。此实验说明额日敦-乌日勒治疗缺血型脑卒中有一定的临床疗效，其作用途径可能是通过抑制IL-6、IL-1β的表达而起到神经功能恢复的作用。