宋洪宁　雷印涛　邢在臣　刘敏

【摘要】 目的 探討口腔鳞状细胞癌（OSCC， 简称鳞癌）中HOXA远端转录本（HOTTIP）的表达及意义。方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测HOTTIP在正常人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）和人OSCC细胞系（HSC-4）中的表达情况;对HSC-4细胞转染HOTTIP-inhibitor， qRT-PCR检测转染后HOTTIP的表达量， MTT实验、细胞划痕实验检测转染后对HSC-4细胞增殖、迁移的影响。结果 通过qRT-PCR检测HOTTIP的表达量， HSC-4细胞中的HOTTIP表达量（1.521±0.117）显著高于HOK细胞的（1.060±0.036）， 差异有统计学意义（P<0.05）;对HSC-4细胞转染HOTTIP-inhibitor， qRT-PCR检测HSC-4细胞转染后HOTTIP的表达量， HOTTIP-inhibitor组HOTTIP的表达量（0.336±0.070）均明显低于Control组和Inhibitor-NC组的（1.062±0.092）、（1.023±0.103）， 差异均有统计学意义（P<0.05）;MTT实验证实HSC-4细胞转染HOTTIP-inhibitor后， HOTTIP-inhibitor组相对于Control组和Inhibitor-NC组， 细胞增殖能力明显下降， 差异有统计学意义（P<0.05）， 提示敲低HOTTIP的表达能显著降低HSC-4细胞的增殖能力;细胞划痕实验中， HOTTIP-inhibitor组细胞的划痕愈合速度减慢， HOTTIP-inhibitor组转染后24 h细胞划痕占比（53.27±1.85）均大于Control组和Inhibitor-NC组的（21.10±0.78）、（25.13±1.69）， 差异均具有统计学意义（P<0.05）， 提示HOTTIP的低表达能有效地降低细胞迁移能力。

结论 与HOK细胞相比， HSC-4细胞中HOTTIP表达明显上调， 敲低HOTTIP的表达能显著降低HSC-4细胞的增殖能力、迁移能力， 证实其在OSCC中发挥促癌作用。

【关键词】 口腔鳞癌;HOXA远端转录本;肿瘤标志物

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.13.085

Expression and significance of HOTTIP in oral squamous cell carcinoma   SONG Hong-ning， LEI Yin-tao， XING Zai-chen， et al. Department of Oral and Maxillofacial Surgery， Second Affiliated Hospital of Shandong First Medical University， Taian 271000， China

【Abstract】 Objective   To discuss the expression and significance of HOXA transcript at the distal tip （HOTTIP） in oral squamous cell carcinoma （OSCC）. Methods   Real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction （qRT-PCR） was used to detect the expression of HOTTIP in normal human oral keratinocytes （HOK） and human OSCC cell line （HSC-4）. The expression of HOTTIP after transfection was detected by qRT-PCR， and the effects of transfection on proliferation and migration of HSC-4 cells were detected by MTT assay and cell scratch assay. Results   The expression of HOTTIP was detected by qRT-PCR. The expression of HOTTIP in HSC-4 cells （1.521±0.117） was significantly higher than  （1.060±0.036） in HOK cells， and the difference was statistically significant （P<0.05）. HSC-4 cells were transfected with HOTTIP-inhibitor. QRT-PCR was used to detect the expression of HOTTIP in HSC-4 cells. The expression of HOTTIP in the HOTTIP-inhibitor group （0.336±0.070） was significantly lower than （1.062±0.092） and （1.023±0.103） in the Control group and Inhibitor-NC group， their differences were statistically significant （P<0.05）. MTT experiments confirmed that after HSC-4 cells were transfected with HOTTIP-inhibitor， the cell proliferation ability of HOTTIP-inhibitor group was significantly lower than that of Control group and Inhibitor-NC group， and the difference was statistically significant （P<0.05）， suggesting that the expression of HOTTIP can significantly reduce the proliferation ability of HSC-4 cells. In the cell scratch test， the scratch healing speed of the cells in the HOTTIP-inhibitor group was slowed down. The percentage of cell scratches （53.27±1.85） in the HOTTIP-inhibitor group at 24 h after transfection was greater than （21.10.±0.78） and （25.13±1.69） in the Control group and Inhibitor-NC group， and the differences were statistically significant （P<0.05）， suggesting that the low expression of HOTTIP can effectively reduce the cell migration ability. Conclusion   Compared with HOK cells， the expression of HOTTIP in HSC-4 cells was significantly up-regulated. Knocking down the expression of HOTTIP can significantly reduce the proliferation and migration of HSC-4 cells， confirming that it plays a pro-cancer role in OSCC.

【Key words】 Oal squamous cell carcinoma; HOXA transcript at the distal tip; Tumor markers

口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma， OSCC）在口腔颌面部恶性肿瘤中占比高达80%以上， 每年约有50万新增病例， OSCC易发生淋巴结转移， 晚期可发生远处转移， 经治疗后， 患者5年生存率只有50%～60%[1]， 预后较差， 肿瘤的局部复发和远处转移特性是治疗失败的最重要因素[2]， 其发病机制尚未阐明。因此， 探索与OSCC发生、发展和预后相关的生物学标记物显得十分重要。近年来许多研究证实[3， 4]，

在许多恶性肿瘤中， 都会存在一个共同现象即长链非编码RNA（long non-coding RNA， lncRNA）的异常表达， 其与肿瘤的发生发展关系密切， HOXA远端转录本（HOXA transcript at the distal tip， HOTTIP）属于lncRNA的一种， 研究发现其在多种恶性肿瘤中的表达同样具有差异性， 并通过影响肿瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡、转移等参与肿瘤的形成和发展[5-7]。但关于其在OSCC中的表达情况的研究甚少， 本研究采用qRT-PCR方法检测HOTTIP在HOK和HSC-4细胞中的表达情况， 并研究敲低HOTTIP对HSC-4细胞增殖及迁移的影响， 以期为OSCC的诊断及分子治疗提供重要的参考。……