李 岚 段 纲 杨春艳 李晓成

1.广西壮族自治区畜牧站，南宁530022；2.云南农业大学动物医学院，昆明650201；3.云南省楚雄州农产品质量安全检测中心，云南楚雄675000；4.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266032

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的一种以严重腹泻、呕吐、脱水和食欲下降等为主要特征的急性、高度接触性猪肠道传染病[1]。2010年末，我国大面积暴发以新生仔猪严重腹泻、高发病率及高死亡率为主要特征的腹泻疫情，给养猪业造成了严重的经济损失[2]。近年来，其流行情况越来越复杂，发病率和死亡率依然居高不下[3]。PEDV 基因组为线形不分节段的单股正链RNA，核酸具有侵染性。PEDV 的S 结构蛋白在免疫介导中具有非常重要的作用，它的C 端拥有5 个疏水残基链，在此处有可能形成α 螺旋，起到膜受体的作用，其S1 区被推断在肠嗜性表达中起一定作用，并含有主要中和作用的抗原决定簇。此外，S 蛋白还具有识别靶细胞、促进细胞和细胞膜的融合等作用。分析PEDV 流行株S基因，可反映流行毒株的遗传变异情况，为疫苗株的选择和PEDV 的防治提供依据。试验扩增了我国6 省市的19 个PEDV 流行毒株S基因，并对其进行了序列测定与分析，以探究我国PEDV 的遗传变异规律，丰富我国PEDV的分子流行病学。

1 材料与方法

1.1 病料样品

采集自6 省份13 个疑似PEDV 发病猪场的7日龄内仔猪小肠及其内容物样品，共19 份。样品编号、采样地区详见表1。

表1 19 个PEDV 样品

1.2 主要试验材料

TRIzol LS R Reagent RNA 提取试剂盒购自美国Invitrogen 公司；PrimeScript One Step RT-PCR Kit、EZ-10 Spin Column Plasmid Mini-preps kit、感受态大肠杆菌Escherichia coliDH5α 均购自宝生物工程（大连）有限公司；……