王万鹏 蒯巧林 唐伯玉 王维 梁森林 潘艳 高甄典 李娟

223400 淮安，南京医科大学康达学院附属涟水县人民医院肾脏科(王万鹏，蒯巧林，唐伯玉，梁森林，高甄典，李娟)，检验科(王维，潘艳)

慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)是一个世界性的公共卫生与健康问题[1]。越来越多的基础及临床研究表明，无论原发病如何，蛋白尿均可加速CKD的进展。因此蛋白尿是CKD防治工作中重要的靶点，减少蛋白尿的发生发展将有助于延缓CKD的进展，改善患者预后。足细胞损害是引起肾小球性蛋白尿重要的病理因素，与多种肾小球疾病的发生发展关系密切。临床常见的原发性或继发性CKD，均伴有不同程度的足细胞损伤。因此，有关足细胞保护的研究在各型CKD的防治工作中都显得尤为重要，是CKD早期防治工作的重点[2]。

我们前期的研究中通过芯片筛查证实狼疮性肾炎(lupus nephritis，LN)患者中存在miRNA表达异常，扩大样本验证后发现异常升高的miR-130b与患者24 h尿蛋白定量呈正相关性[3]，但miR-130b在足细胞损伤中的作用尚不明确。本研究中，我们通过嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside，PAN)诱导足细胞体外损伤模型，并使用微小RNA抑制剂(inhibitor)观察miR-130b在足细胞损害中的作用以及机制。

材料和方法

一、实验材料

主要试剂PAN购自美国Sigma，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鬼笔环肽(上海翊圣生物科技有限公司)，RPMI-1640细胞培养液(美国Gibco公司)。miRNA提取试剂盒、miRNA反转录试剂盒、miRNA实时定量PCR试剂盒、Lipofectamine RNAiMax和Lipofectamine 2000转染试剂、MiR-130b和内参U6特异性探针引物(美国Life Technologies)；MiR-130b抑制剂和模拟物(mimic/inhibitor)及各自对照(NC)(广州瑞博生物有限公司)；双荧光素酶报告基因检测试剂盒和Psicheck-2载体(美国Promega)；……