李玉红 谢萍 李远 谢辉 洪有勤 陈勇

【摘要】 目的：观察TLR4、N-HDL-C在冠心病中的表达，并探讨辛伐他汀对粥样斑块的干预机制。方法：选择冠心病患者66例，其中急性冠脉综合征（ACS）46例，稳定型心绞痛（SAP）20例，分别设为ACS组及SAP组;另选取胸痛患者24例，设为对照组。比较三组血脂水平、Toll样受体4（TLR4）、非高密度脂蛋白胆固醇（N-HDL-C）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平。66例均给予辛伐他汀治疗，1个月后再次检测上述指标。结果：ACS组治疗前TLR4、N-HDL-C、hs-CRP水平均显著高于SAP组和对照组（P<0.05）。ACS组治疗后TLR4、N-HDL-C和hs-CRP水平均较治疗前降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：在急性冠脉综合征患者中，TLR4、N-HDL-C和hs-CRP表达水平均较高，而辛伐他汀可以起到抗炎、稳定和逆转斑块的作用，主要机制可能是抑制TLR4-N-HDL-C信号传导，调节炎性因子的表达。

【关键词】 冠心病 Toll样受体4 非高密度脂蛋白胆固醇 辛伐他汀 炎症

[Abstract] Objective： To observe the expressions of TLR4 and N-HDL-C in coronary heart disease， and explore the intervention mechanism of Simvastatin on atherosclerotic plaque. Method： A total of 66 patients with coronary heart disease were enrolled， including 46 patients with acute coronary syndrome （ACS） and 20 patients with stable angina pectoris （SAP）， and respectively set as the ACS group and the SAP group. Another 24 patients with chest pain were selected as the control group. Serum lipids levels， Toll-like receptor 4 （TLR4）， non-high-density lipoprotein cholesterol （N-HDL-C） and hypersensitive C-reactive protein （hs-CRP） were compared among the three groups. All 66 patients were treated with Simvastatin， and the indicators were tested again one month later. Result： The levels of TLR4， N-HDL-C and hs-CRP in the ACS group before treatment were significantly higher than those of the SAP group and the control group （P<0.05）. The levels of TLR4， N-HDL-C and hs-CRP in the ACS group after treatment were lower than those before treatment， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The expression of TLR4， N-HDL-C and hs-CRP were significantly increased in patients with acute coronary syndrome. While Simvastatin has anti-inflammatory， stabilizing and reversing plaque effects， the main mechanism may be through inhibiting TLR4-N-HDL-C signal transduction and regulating the expression of inflammatory factors.

動脉粥样硬化是指动脉内膜有脂质等血液成分的沉积，平滑肌细胞增生和胶原纤维增多，形成粥糜样含脂坏死病灶和血管壁硬化[1]。同时，动脉粥样硬化又是一种炎症性疾病[2-3]。冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）是多因素相互作用的过程，其中以脂代谢和炎症反应为主[4]。非高密度脂蛋白胆固醇（N-HDL-C）是评估调脂治疗效果的极为关键的指标。近期有研究指出，N-HDL-C对心血管疾病的预测作用比LDL-C更显著。临床中，多使用他汀类药物进行降脂治疗[5]。研究表明，他汀类药物有抗炎、抗氧化作用[6]。另有研究报道，阿托伐他汀可抑制巨噬细胞上的TLR4的表达，从而抑制炎症反应[7]。他汀类药物可预防和治疗冠心病，但其机制尚不明确。本文主要观察TLR4、N-HDL-C在冠心病中的表达，进而探讨他汀类药物抑制或延缓动脉粥样硬化的机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年3月-2017年3月于笔者所在医院心内科住院的冠心病患者66例及胸痛患者24例。66例纳入标准：急性心肌梗死、不稳定型心绞痛和稳定型心绞痛均符合美国心脏病学会/美国心脏协会制定的诊断标准，经冠状动脉造影检查证实。24例纳入标准：既往无冠心病史，经心电图、心肌酶学和冠状动脉造影检查排除冠心病。排除标准：急性感染性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、严重肝肾疾病;7 d内有外伤或手术史。66例中急性冠脉综合征（ACS）46例，稳定型心绞痛（SAP）20例，分别设为ACS组及SAP组。ACS组中急性心肌梗死25例，不稳定型心绞痛21例;男27例，女19例;平均年龄（62.91±14.10）岁。SAP组中男9例，女11例;平均年龄（59.41±9.83）岁。将24例胸痛患者设为对照组，男9例，女15例;平均年龄（60.11±8.32）岁。三组一般资料对比，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 药物治疗 66例冠心病患者均口服辛伐他汀（江苏扬子江药业，国药准字H20000636），20 mg/次，1次/d，治疗1个月。

1.2.2 檢测方法 所有患者在治疗前1 d和1个月后分别于清晨采集空腹肘静脉血4 ml，其中2 ml用乙二胺乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，另外2 ml不抗凝，用3 000 r/min低温离心机分离血浆，后留取血清，置于-75 ℃冰箱中保存备用。由全自动生化分析仪测定血清非高密度脂蛋白胆固醇（N-HDL-C）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）。采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）测定TLR4：TLR4的上游引物5-TGG AAG TTG AAC GAA TGG AAT GTG-3，下游引物5-ACC AGA ACT GCT ACA ACA GAT ACT-3，探针5-FAM-AGC ACA CTG AGG ACC GAC ACA CCAA2 TAMRA-3;β-actin的上游引物5-AGA TCA AGA TCA TTG CTC CTC CTG-3，下游引物5-CAT TTG CGG TGG ACG ATG GA-3，探针5-FAM-CGG ACT CGT CAT ACT CCT GCT TGCTG-TAMRA-3。引物和探针由上海生工生物技术公司合成。采用放射免疫法测定hs-CRP。

1.3 观察指标

（1）对比三组N-HDL-C、HDL-C、LDL-C、TC、TG水平，N-HDL-C=TC-HDL-C;（2）对比三组TLR4及hs-CRP水平;（3）分析ACS组中TLR4与N-HDL-C及hs-CRP的相关性;（4）对比ACS组治疗前后TLR4、N-HDL-C及hs-CRP水平。

1.4 统计学处理

采用SPSS 18.0软件包进行数据分析，计量资料以（x±s）表示，两组间比较采用成组t检验，本组治疗前后比较采用配对t检验，多组间比较采用方差分析（LSD-t检验）;计数资料以率（%）表示，采用字2检验;TLR4与N-HDL-C、hs-CRP的相关性采用Spearmans相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组血脂水平比较

ACS组血清N-HDL-C、LDL-C、TC和TG均显著高于SAP组和对照组，血清HDL-C显著低于SAP组和对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 三组TLR4和hs-CRP水平比较

三组TLR4蛋白表达电泳图见图1。SAP组TLR4和hs-CRP水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）;ACS组TLR4和hs-CRP水平均显著高于对照组和SAP组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 ACS组中TLR4与N-HDL-C、hs-CRP相关分析

TLR4与N-HDL-C、hs-CRP均呈正相关，差异均有统计学意义（r=0.731、0.715，P=0.030、0.021）。

2.4 ACS组治疗前后TLR4、N-HDL-C和hs-CRP水平比较

ACS组治疗后TLR4、N-HDL-C和hs-CRP水平均较治疗前降低，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

3 讨论

血脂异常是导致动脉粥样硬化的重要危险因素。血清胆固醇水平与动脉粥样硬化性心血管疾病密切相关。有效降低LDL-C水平，可以显著降低动脉粥样硬化性心血管疾病的发病率，同时也会减小死亡风险[8]。N-HDL-C是指除高密度脂蛋白以外其他脂蛋白中含有的胆固醇的总和，能较好地反映血液中胆固醇的水平，可作为调脂治疗的重要标志物[9]。

冠心病致死率极高，严重危及人们的健康，病理生理基础为冠状动脉粥样硬化。ACS包括不稳定型心绞痛和急性心肌梗死，是在慢性炎症的基础上由某些原因导致冠脉血管内粥样斑块不稳定，破裂出血，使血块堵塞管腔，导致心肌急剧缺血，从而发生急性心血管事件。Toll样受体是一种介导免疫炎症的家族，其中TLR4与动脉粥样硬化关系最密切。国内外研究发现，TLR4在ACS患者外周血单核细胞中的表达水平显著上调，其上调程度与斑块易损性呈正相关[10-11]。研究表明，采用阿托伐他汀干预后，兔动脉粥样硬化斑块内TLR4的表达明显被抑制，提示阿托伐他汀可抑制斑块内TLR4表达，从而起到稳定斑块作用[12]。另有研究发现，巨噬细胞可与mmLDL结合，而后在TLR4的作用下摄取较多的oxLDL，从而加快泡沫细胞破裂，致使斑块易损性增强[13]。超敏C反应蛋白是心血管疾病的重要炎性标志物，多数冠心病患者血清超敏C反应蛋白水平均升高，且其水平与病变程度成正相关。本研究结果发现，ACS组N-HDL-C、TLR4和hs-CRP水平均明显高于SAP组和对照组（P<0.05）。相关性分析显示，ACS组TLR4与N-HDL-C、hs-CRP均呈正相关（P<0.05）。采用辛伐他汀治疗后，ACS组TLR4、N-HDL-C和hs-CRP水平均较治疗前降低（P<0.05）。提示ACS患者机体内N-HDL-C、TLR4和hs-CRP水平均呈增高状态，且升高程度与冠心病严重程度相关。

他汀类药物属降脂药物，是三羟基三甲基戊二酰辅酶抑制剂，因具有抗炎、稳定和逆转斑块等作用而被广泛应用于临床中，推测其主要机制与降脂作用相关，且可能与TLR4-N-HDL-C信号通路相关。对于N-HDL-C致动脉粥样硬化和冠心病的机制尚不明确，因此有待进一步研究。随着临床对他汀类药物的深入研究和对炎症认识的进一步深化，笔者相信一定会开辟出防治冠心病的新思路。

参考文献

[1] Pedersen，Terje R.The success story of LDL cholesterol lowering[J].Circulation Research，2016，118（4）：721-731.

[2] Ross R.Athemsclerosis-an inflammatory disease[J].The New England Journal of Medicine，1999，340（2）：115-126.

[3] Ridker P M，Everett B M，Thuren T，et al.Antiinflammatory therapy with canakinumab for atherosclerotic disease[J].New England Journal of Medicine，2017，377（12）：1119-1131.

[4]程翔.冠心病的抗炎治療：历经艰辛终见彩虹[J].中华心血管病杂志，2018，46（5）：341-343.

[5] Sigdle M，Yadav B K，Gyawail P，et al.Non-high density lipoprotein cholesterol versues low density lipoprotein cholesterol as a discriminating factor for myocarcial infarction[J].BMC Research Notes，2012（5）：640-645.

[6] Satoh M，Takahashi Y，Tabuchi T，et al.Cellular and molecular mechanisms of statins：an update on pleiotropic effects[J].Clinical Science，2015，129（2）：93-105.

[7] Liu M，Tang R，Jiang Y.Study on the function and mechanism of atorvastion in regulating leukemic cell apoptosis by the P13K/Akt pathway[J].International Journal of Clinical & Experimental Medicine，2015，8（3）：3371-3380.

[8] Baigent C，Keech A，Keamey P M，et al.Efficacy and safety of cholesterol-lowering treatment：prospective meta-analysis of data from 90 056 participants in 14 randomised trials of statins[J].Lancet，2005，366（9493）：1267-1278.

[9]赵水平.《中国成人血脂异常防治指南（2016年修订版）》要点与解读[J].中华心血管病杂志，2016，44（10）：827-829.

[10] Methe H，Kim J O，Kofler S，et al.Expansion of circulating TLR4-positive monocytes in patients with ACS[J].Circulation，2005，111（20）：2654-2661.

[11]李玉红，谢萍，李远，等.急性冠脉综合征患者TOLL样受体4的变化及通心络的干预作用[J].临床心血管病杂志，2014，255（9）：776-778.

[12] Fang D，Yang S，Quan W，et al.Atorvastatin suppresses Toll-like receptor 4 expression and NF-κB activation in rabbit atherosclerotic plaques[J].European Review for Medical and Pharmacological Sciences，2014，18（2）：242-246.

[13] Zeuke S，Ulmer A J，Kusumoto S，et al.TLR4-mediated inflammatory activation of human coronary artery endothelial cells by LPS[J].Cardiovascular Research，2002，65（3）：126-134.

（收稿日期：2019-11-04） （本文编辑：李盈）