王泽鑫， 关利君， 李建明， 王志超， 薛梦若， 秦孝军

内蒙古医科大学附属医院 介入放射科， 呼和浩特 010050

肝癌为目前全球范围内最为常见的恶性肿瘤之一，每年约有60万人死于肝癌，近10年来，随着现代诊断技术以及外科手术的不断发展和进步，肝癌的临床诊断和外科手术治疗已经取得了长足的进步[1]。但肝癌发病较为隐匿，患者早期临床症状无特异性，大部分患者临床确诊时已经处于疾病中晚期，失去了手术治疗的机会，患者5年生存率较低[2-3]。研究[4]表明，microRNA-21(miR-21)与肝癌的发生发展、侵袭和转移密切相关，但miR-21对肝癌的具体调控机制尚不明确。Wnt信号通路具有明显的促癌作用，与多种恶性肿瘤的发生发展有关，而Wnt2是Wnt信号通路中一种重要的信号转导因子，研究[5]证实，在恶性肿瘤细胞中Wnt2蛋白高表达，可促进肿瘤细胞的增殖。miR-21是否通过Wnt信号通路影响肝癌细胞的增殖和转移，目前尚无相关报道。本研究拟探讨miR-21靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞来源 胚肾细胞株HEK293、肝癌细胞株HepG2以及正常肝细胞株LO2均购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所。

1.2 主要试剂与仪器 DMEM高糖培养基(美国Hyclone公司)，青霉素-链霉素混合溶液(美国Hyclone公司)，澳洲胎牛血清(美国Thermo公司)，0.25%胰蛋白酶(美国Thermo公司)，miR-21抑制剂及其阴性对照(上海吉码生物科技有限公司)，LipofectaminTM 2000(美国Invitrogen公司)，质粒提取试剂盒(美国Invitrogen公司)，Trizol(美国Invitrogen公司)，兔抗人Wnt2多克隆抗体(武汉中美科技有限公司)，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)，HRP标记二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)，四甲基氮唑盐(MTT，美国Sigma公司)，BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京碧云天生物技术有限公司)。……