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核桃壳的化学成分

2020-04-18林玉萍张旭虎春艳赵声兰

食品工业 2020年8期
关键词:流分核桃壳分子式

林玉萍,张旭,虎春艳,赵声兰

云南中医药大学中药学院(昆明 650500)

核桃(Walnut)又称胡桃,学名Juglans regia L.,为乔木植物,可高达15 m;树皮灰褐色,幼枝有密毛[1]。核桃为胡桃科核桃属(Juglans L.)植物,全世界约18种,主要分布于北温带。我国有4种1变种,引入栽培2种,其中有些种为著名的干果和木本油料,又为珍贵用材树种,其枝、叶、外果皮、根皮、坚果内隔及果仁均可入药[2]。现代药理研究表明,核桃具有抗肿瘤、抗菌、镇痛消炎等作用,而核桃壳的化学成分报道较少[3]。

目前,核桃是世界重要的油料、干果树种之一,在中国栽培面积广,品种多,资源丰富。其中,云南是我国著名的核桃主产区之一,核桃年产量居全国之首。核桃壳是核桃取仁后的废弃物,目前大多被当作燃料,利用价值低,且污染环境[4]。以促进资源的综合利用,对核桃壳的化学成分进行研究,分离鉴定16个化合物,分别为对羟基苯甲酸甲酯(1)、对羟基苯甲酸乙酯(2)、4-羟基苯甲酸(3)、香荚兰酸(4)、阿魏酸(5)、5-羟基-4’-甲氧基-7-甲基黄酮(6)、4-羟基苯甲醛(7)、1-(4-羟基苯基)丙基-1-丙三醇(8)、丁香醛(9)、芥子醛(10)、2,3-二羟基-1-(4-羟基苯基)丙-1-酮(11)、硬脂酸(12)、4-羟基肉桂醛(13)、硬脂酸单甘油酯(14),β-谷甾醇(15)、胡萝卜苷(16)。化合物8~12为首次从核桃壳中分离得到。

1 材料、仪器与设备

核桃壳(中国云南大理漾濞县);核桃壳提取物、核桃壳大孔树脂纯化浸膏(实验室自制)。

柱层析硅胶(200~300目)、薄层层析硅胶H(青岛海洋化工厂);Sephadex LH-20柱(瑞典Pharmacia公司);日本Yanaco显微熔点仪(温度未校正);IKARV8旋转蒸发仪(广州仪科实验室技术有限公司);LGJ-10F真空冷冻干燥机(河南兄弟仪器设备有限公司);Autospec-3000质谱仪(美国Beckman公司);AV-400 MHz型超导核磁共振谱仪(瑞士Bruker公司);DRX-500 MHz型超导核磁共振谱仪(瑞士Bruker公司);核磁氘代试剂(美国CIL公司、Aldrich Chemistry公司);所用试剂为分析纯或工业级。

2 提取与分离

核桃壳粗粉(7 kg)以95%乙醇煮提四次,回收溶剂得浸膏(273 g),溶解于水溶液中,用乙酸乙酯萃取3次,回收溶剂,得浸膏(47.7 g),记为Fr.A;用正丁醇萃取3次,回收溶剂,得浸膏(24.8 g),记为Fr.B。

Fr.A组分利用硅胶(200~300目)柱色谱,以环己烷-乙酸乙酯(100∶0~5∶1)、氯仿-甲醇(50∶1~5∶1)溶剂系统梯度洗脱,经TLC检查合并,划分为6个流分(A-1~6)。其中A-2流分经硅胶柱色谱,环己烷-乙酸乙酯(50∶1)洗脱,得化合物12(1 g),14(2 g);A-3流分经硅胶柱色谱,环己烷-乙酸乙酯(20∶1)洗脱,得化合物6(30 g),15(2 g)。

Fr.B利用硅胶(200~300目)柱色谱,以氯仿、氯仿-甲醇(50∶1~5∶1)梯度洗脱,经TLC检查合并,划分为5个流分(B-1~B-5)。其中,B-2流分经葡聚糖凝胶LH-20(丙酮)纯化,再经硅胶柱色谱,氯仿-甲醇(20∶1)洗脱得化合物11(50 mg)。B-3流分经硅胶柱色谱,氯仿-甲醇(20∶1)洗脱得化合物16(100 mg)。

20 kg核桃壳,分次用59%乙醇煮提3次,回收溶剂得到核桃壳提取物。用NKA-9大孔树脂,按上样液pH 5.0,上样液质量浓度1 mg/mL,上样流速1 mL/min,5 BV的95%乙醇洗脱进行纯化,纯化得到核桃壳大孔树脂纯化浸膏198 g。用硅胶(200~300目)柱色谱,以氯仿-甲醇(100∶0~5∶1)溶剂系统梯度洗脱,经TLC检查合并,划分为8个流分(C-1~C-8)。其中,C-1流分经硅胶柱色谱,用氯仿-甲醇(50∶1)洗脱,得化合物1(40 mg),2(20 mg)。C-2流分经葡聚糖凝胶LH-20柱色谱(丙酮洗脱)纯化,再经硅胶柱色谱,用氯仿-甲醇(20∶1)洗脱,得化合物3(30 mg),4(20 mg)。C-3流分经葡聚糖凝胶LH-20柱色谱(丙酮洗脱)纯化,再用硅胶柱色谱,用氯仿-甲醇(15∶1)洗脱,得化合物5(40 mg),7(21 mg),8(15 mg)。C-5流分经葡聚糖凝胶LH-20柱色谱(氯仿-甲醇洗脱),经硅胶柱色谱,用氯仿-甲醇(20∶1)洗脱,得化合物9(10 mg),10(12 mg),13(22 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末,mp 123~137 ℃。结合EIMS m/z:152.1[M]+,推测分子式为C8H8O3。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:7.76(2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),6.82(1H,d,J=8.5 Hz,H-3,5),3.85(3H,s,H—OCH3)。13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:122.3(C-1),131.5(C-2,6),115.4(C-3,5),161.5(C-4),160.2(C-7),52.6(C—OCH3)。以上数据与文献[5]报道的数据基本一致,故鉴定化合物1为对羟基苯甲酸甲酯。

化合物2:白色粉末,mp 113~117 ℃。结合EIMS m/z:166.2 [M]+,推测分子式为C9H10O3。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:7.75(2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),6.80(1H,d,J=8.5 Hz,H-3,5),4.35(2H,q,H-OCH2),1.38(3H,t,H-CH3)。13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:122.6(C-1),131.4(C-2,6),115.7(C-3,5),162.6(C-4),166.2(C-7),60.7(C—OCH2),14.3(C-CH3)。数据与文献[6]报道的数据基本一致,鉴定化合物2为对羟基苯甲酸乙酯。

化合物3:白色粉末,mp 212~216 ℃。结合EIMS m/z:138.1 [M]+,推测分子式为C7H6O3。1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.91(2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),6.90(1H,d,J=8.5 Hz,H-3,5)。13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:122.7(C-1),131.5(C-2,6),115.6(C-3,5),163.6(C-4),169.5(C-7)。数据与文献[7]报道的数据基本一致,故鉴定化合物3为4-羟基苯甲酸。

化合物4:白色结晶,mp 206~209 ℃。结合EIMS m/z:168.2 [M]+,推测分子式为C8H8O4。1HNMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.54(2H,m,H-6,2),6.83(1H,d,J=8.7 Hz,H-5),3.88(3H,s,H-OCH3)。13CNMR(CD3OD,100 MHz)δ:123.6(C-1),116.4(C-2),149.2(C-3),153.3(C-5),114.4(C-6),170.5(C-7),56.9(C—OCH3)。以上数据与文献[8]报道的数据基本一致,鉴定化合物4为香荚兰酸。

化合物5:白色结晶,mp 166~170 ℃。结合EI-MS m/z:194.2 [M]+,推测分子式为C10H10O4。1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.42(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),7.13(1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.98(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),6.75(1H,dd,J=8.5,2.0 Hz,H-6),6.26(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),3.84(3H,s,H-OCH3)。13CNMR(CD3OD,100 MHz)δ:127.6(C-1),112.1(C-2),149.3(C-3),147.8(C-4),117.0(C-5),130.1(C-6),145.3(C-7),116.4(C-8),171.3(C-9),56.4(C-OCH3)。数据与文献[9]报道的数据基本一致,故鉴定化合物5为阿魏酸。

化合物6:黄色结晶,HCl-Mg反应呈阳性。结合EI-MS m/z:282.3 [M]+,推测分子式为C17H14O4。1HNMR(CDCl3,400 MHz)δ:7.94(2H,d,J=8.7 Hz,H-2′,6′),6.94(2H,d,J=8.7 Hz,H-3′,5′),6.83(1H,s,H-3),6.80(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.42(1H,d,J=2.0,H-6),3.95(3H,s,H-OCH3),2.33(3H,s,H-CH3)。13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:164.0(C-2),106.3(C-3),183.1(C-4),163.0(C-5),115.1(C-6),148.5(C-7),107.1(C-8),123.1(C-1′),130.2(C-2′,6′),115.3(C-3′,5′),161.2(C-4′),56.0(C—OCH3),22.6(C—CH3)。以上数据与文献[10]报道的数据基本一致,故鉴定化合物6为5-羟基-4’-甲氧基-7-甲基黄酮。

化合物7:浅黄色结晶,mp 115~118 ℃。结合EIMS m/z:122.1 [M]+,推测分子式为C7H6O2。1H NMR(CDCl3,500 MHz)δ:9.76(1H,s,H-7),7.74(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,6),6.90(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5)。13C NMR(CDCl3,125 MHz)δ:129.2(C-1),133.5(C-2,6),116.3(C-3,5),165.1(C-4),192.9(C-7)。数据与文献[7]报道的数据基本一致,故鉴定化合物7为4-羟基苯甲醛。

化合物8:白色粉末状固体,结合EI-MS m/z:182.2 [M]+,推测分子式为C9H12O4。1H NMR(CD3OD,800 MHz)δ:7.15(2H,d,J=9.4 Hz,H-2,6),6.76(2H,d,J=9.4 Hz,H-3,5),4.68(1H,d,J=4.4 Hz,H-7),4.19(1H,m,H-8),3.78(1H,m,H-9a),3.12(1H,m,H-9b);13C NMR(CD3OD,200 MHz)δ:132.8(C-1),128.8(C-2,6),116.5(C-3,5),158.1(C-4),87.4(C-7),72.7(C-8),63.2(C-9)。以上数据与文献[11]报道的数据一致,故鉴定化合物8为1-(4-羟苯基)丙三醇。

化合物9:白色粉末状固体,mp 108~112 ℃。结合EI-MS m/z:182.2 [M]+,推测分子式为C9H10O4。1H NMR(CD3OD,500 MHz)δ:9.76(1H,s,H-9),7.24(2H,s,H-2,6),3.91(6H,s,H-3,5OCH3)。13C NMR(CD3OD,125 MHz)δ:129.1(C-1),108.2(C-2,6),149.6(C-3,5),143.8(C-4),192.9(C-9),56.8(C-3,5OCH3)。数据与文献[12]报道的数据一致,故鉴定化合物9为丁香醛。

化合物10:白色粉末状固体,mp 106~110 ℃。结合EI-MS m/z:208.2 [M]+,推测分子式为C11H12O4。1H NMR(CD3OD,500 MHz)δ:9.61(1H,d,J=7.7 Hz,H-9),7.57(1H,d,J=15.8 Hz,H-7),6.96(2H,s,H-2,6),6.67(1H,d,J=15.8,7.7 Hz,H-8),3.90(6H,s,H-3,5OCH3)。13C NMR(CD3OD,200 MHz)δ:126.4(C-1),107.6(C-2,6),149.6(C-3,5),138.3(C-4),156.5(C-7),127.0(C-8),196.1(C-9),56.8(C-3,5OCH3)。以上数据与文献[13]报道的数据一致,故鉴定化合物10为芥子醛。

化合物11:白色粉末状固体,结合EI-MS m/z:182.2 [M]+,推测分子式为C9H10O4。1H-NMR(C5D5N,500 MHz)δ:8.30(2H,d,J=9 Hz,H-2,6),7.16(2H,d,J=8.5 Hz,H-3,5),5.62(1H,t,H-8),4.45(1H,dd,J=3.5 Hz,H-9a),4.37(1H,dd,J=5 Hz,H-9b)。13C NMR(C5D5N,500 MHz)δ:116.0(C-1),127.2(C-2,6),131.8(C-3,5),163.8(C-4),199.2(C-7),75.8(C-8),65.9(C-9)。数据与文献[10]报道的数据一致,故鉴定化合物11为2,3-二羟基-1-(4-羟苯基)丙-1-酮。

化合物1 2:白色粉末,结合E I-M S m/z:284[M]+,推测分子式为C18H36O2。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:2.21(2H,t,J=7.5 Hz,H-2),1.54(2H,m,H-17),1.19(28H,br.s,H-3~16),0.85(3H,t,J=6.8 Hz,H-18)。数据与文献[14]报道的数据一致,故鉴定化合物9为硬脂酸。

化合物13:淡黄色结晶,mp 210~213 ℃。结合EI-MS m/z:148.1[M]+,推测分子式为C9H8O2。1H NMR(CD3OD,500 MHz)δ:9.64(1H,d,J =7.7 Hz,H-9),7.54(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),7.38(1H,d,J=8.8 Hz,H-2,6),7.04(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.84(1H,d,J=8.8 Hz,H-3,5),6.62(2H,t),6.59(1H,d);13C NMR(CD3OD,200 MHz)δ:126.43(C-1),132.02(C-2,6),117.03(C-3,5),162.33(C-4),156.02(C-7),127.06(C-8),196.22(C-9)。数据与文献[15]报道的数据一致,故鉴定化合物13为4-羟基肉桂醛。

化合物14:白色油状物,结合EI-MS m/z:330.2[M]+,推测分子式为C19H36O4。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:4.20(2H,m,H-1′),3.92(1H,m,H-2′),3.75(1H,dd,J=11.4,3.5Hz,H-3′a),3.60(1H,dd,J=11.4,5.6Hz,H-3′b),2.38(2H,t,J=7.54 Hz,H-2),1.62-1.26(26H,brs,13×CH2),0.87(3H,t,J=6.76 Hz,H-16)。13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.3(C-1),34.2(C-2),31.9(C-3),29.2~29.7(C-4~11),24.9(C-12,14),22.7(C-13,15),14.1(C-16),65.2(C-1′),70.3(C-2′),63.4(C-3′)。数据与文献[16]报道的数据一致,故鉴定化合物14为硬脂酸单甘油酯。

化合物15:无色针状晶体,乙酸酐-浓硫酸反应呈阳性,mp 135~137 ℃。与β-谷甾醇标准品进行TLC对照,多种展开系统下Rf值均一致,故鉴定化合物15为β-谷甾醇。

化合物16:白色粉末(甲醇),乙酸酐-浓硫酸和Molish反应呈阳性,mp>280 ℃。与胡萝卜苷标准品进行TLC对照,多种展开系统下Rf值均一致,故鉴定化合物16为胡萝卜苷。

4 结论

从核桃壳中分离鉴定16个化合物,分别为对羟基苯甲酸甲酯(1)、对羟基苯甲酸乙酯(2)、4-羟基苯甲酸(3)、香荚兰酸(4)、阿魏酸(5)、5-羟基-4’-甲氧基-7-甲基黄酮(6)、4-羟基苯甲醛(7)、1-(4-羟基苯基)丙基-1-丙三醇(8)、丁香醛(9)、芥子醛(10)、2,3-二羟基-1-(4-羟基苯基)丙-1-酮(11)、硬脂酸(12)、4-羟基肉桂醛(13)、硬脂酸单甘油酯(14),β-谷甾醇(15)、胡萝卜苷(16),其中4-羟基苯甲酸(化合物3)具有防腐、杀菌等作用;4-羟基苯甲醛(化合物7)具有抗血小板聚集等作用;4-羟基肉桂醛(化合物15)具有抗癌、抗炎、抑制肿瘤、降胆固醇等作用。核桃壳中含有大量酚性化合物,是其抗氧化、抗菌、降脂等作用的物质基础。对核桃壳的化学成分和药理活性的研究,为核桃壳进一步资源的开发利用开拓前景。

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