极小种群喙核桃ISSR-PCR反应条件的建立与优化*

2020-04-13史艳财朱成豪熊忠臣蒋运生

广西科学院学报 2020年1期

史艳财，邹蓉**，朱成豪，熊忠臣，蒋运生

(1.广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西桂林 541006；2.桂林医学院药学院，广西桂林 541004)

0 引言

喙核桃(Annamocaryasinensis)为胡桃科(Juglandaceae)喙核桃属(Annamocarya)植物，为第三纪古热带孑遗植物[1]。喙核桃果实为核果，球形或卵球形，顶端具鸟喙状尖头，该种仅分布于贵州、广西、云南等少数几个省区[2]，其木材结构均匀，花纹美观，是制作军工设备、家具等的优良木材。喙核桃仅有极低比例的种子可萌发成苗。此外，喙核桃的分布区域多年来破坏严重，植株数量日趋减少，已被列为国家二级保护植物[3]。目前，对喙核桃的研究仅有群落调查[4]、木材解剖及其分类位置[5]、保育遗传[6]等方面。为准确揭示喙核桃的遗传多样性，以便于进行后续资源评价、良种选育及种苗繁育等工作，亟需建立其特定的多样性检测体系。

Inter-simple Sequence Repeat (ISSR)分子标记技术由Zietkiewicz等于1994年提出，具有操作简易、成本低、灵敏度高等特点，推出后即被广泛应用于植物遗传多样性研究中[7]。ISSR-PCR扩增反应条件对检测结果至关重要，将该技术用于物种遗传多样性检测时需建立其对应的扩增反应体系。本文将正交和单因素试验相结合，开展dNTPs、Mg2+、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、循环次数及退火温度对喙核桃ISSR-PCR扩增效果影响的研究，以期建立喙核桃ISSR-PCR最佳反应体系，为其种质资源评价等奠定基础。