APP下载

巨型艾美耳球虫AMA1蛋白单克隆抗体的制备及其功能鉴定

2020-03-31罗伏兵刘晓冬刘贤勇徐发荣沈光年马志军汤新明

中国兽医杂志 2020年11期
关键词:小鼠

罗伏兵 , 刘晓冬 , 梁 琳 , 刘贤勇 , 徐发荣 , 沈光年 , 马志军 , 索 勋 , 汤新明

(1.北京市动物疫病预防控制中心 , 北京 大兴 102629 ; 2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 , 北京 海淀 100193 ; 3.中国农业大学动物医学院 , 北京 海淀 100193)

鸡球虫病是艾美耳球虫感染引起的严重危害养鸡业的寄生虫病,全球每年因球虫病造成的损失高达30亿美元[1]。以活卵囊为组分的球虫病疫苗已有数十年的应用历史,但存在影响鸡群生产性能的风险。开发安全高效的基因工程球虫病疫苗是学界研究的热点。顶膜抗原(Apical membrane antigen,AMA)是顶复门寄生虫微线体分泌的I型跨膜蛋白,由胞质区、跨膜区和胞外区组成。AMA1蛋白在顶复门原虫中高度保守,且在子孢子阶段表达水平高[2],可能参与虫体入侵宿主细胞。巨型艾美耳球虫AMA1(EmAMA1)被认为是免疫原性较好的保护性抗原,具备开发成为亚单位疫苗的潜能[3]。因此,深入解析EmAMA1的生物学和免疫学功能具有重要意义。单克隆抗体具有高特异性、均一性以及方便生产的特点,是病原学或血清学检测技术、感染与免疫机制等研究的主要工具之一。本试验旨在构建一/多株抗EmAMA1的单克隆抗体,为EmAMA1基因功能和应用研究提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 巨型艾美耳球虫北京株(中国农业大学动物医学院保存);SP2/0骨髓瘤细胞;次黄嘌呤-氨甲蝶呤-胸腺嘧啶核苷(HAT);HRP标记的山羊抗小鼠IgG;SBA Clonotyping System-HRP;BALB/c雌性小鼠(购自北京华阜康生物科技股份有限公司)。

1.2 动物免疫 利用PCR从pSDEP2AAMA1S[4]扩增EmAMA1序列后,连接至pEt28a载体,转化至DE3菌株进行蛋白的诱导表达。……

登录APP查看全文

猜你喜欢

小鼠
爱捣蛋的风
晚安,大大鼠!
萌小鼠,捍卫人类健康的“大英雄”
视神经节细胞再生令小鼠复明
小鼠大脑中的“冬眠开关”
今天不去幼儿园
清肝二十七味丸对酒精性肝损伤小鼠的保护作用
米小鼠和它的伙伴们
Avp-iCre转基因小鼠的鉴定
加味四逆汤对Con A肝损伤小鼠细胞凋亡的保护作用