蒋 伟，李 涛，王静静，施 晓，季国忠

0 引 言

原发性肝癌是全球第六大常见恶性肿瘤，也是引起癌症相关死亡的第三大原因[1]。目前针对原发性肝癌首选的治疗方法仍是外科手术切除，但由于肝癌早期症状不明显，许多患者在就诊已处于中晚期，导致外科手术治疗的效果不佳，术后2年复发率高达50%，5年生存率仅10%左右[2]。索拉非尼是首个批准上市的肝癌分子靶向药，仅能延长患者2个月生存期，且由于其多靶向性，常引起严重的全身性不良反应[3]。因此，寻求新的肝癌治疗策略并深入探究其分子机制意义重大。

MicroRNA(miRNA)是一种单链非蛋白编码RNA，包含大约22个核苷酸。miRNA可以通过与靶基因mRNA的3′UTR结合抑制基因表达，从而抑制RNA的翻译或促进其降解。既往研究表明，miRNA在细胞的生长、增殖和肿瘤发生等生理学或病理学过程中发挥作用[4-5]。miR-34a是miR34家族中的一员，最近研究证实miR-34a在肝癌中表达下降[6-7]。然而，miR-34a在原发性肝癌中的作用及其相关机制仍有待探究。因此本研究旨在探讨miR-34a对肝癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料人肝细胞癌细胞株HepG2、Huh-7购自上海生物化学与细胞生物学研究所，人肾上皮细胞系HEK393T细胞来自本课题组保存；细胞用DMEM培养基、胎牛血清、抗生素和胰蛋白酶均购自Gibco公司；miR-34a mimics和mimics control由上海吉玛制药技术有限公司设计合成；miR-34a和c-Met引物、野生型c-Met报告基因(pGL3-c-Met)和突变型c-Met报告基因(pGL3-c-Met-mut)均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成；Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司；miRNA逆转录试剂盒miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit和miRNA qPCR试剂盒miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix均购自南京诺维赞生物科技有限公司；……