刘娅琴，王先菊，张敏，李玮，杜洪志，吴珊珊

（贵州中医药大学，贵州 贵阳）

0 引言

天冬为百合科植物天冬 Asparagus cochinchinensis （Lour.）Merr.的干燥块根。甘、苦，寒。归肺、肾经。具有养阴润燥，清肺生津的功效[1]。主产于贵州、云南、四川、重庆、湖南等地，以贵州产天冬产量最大、品质最佳[2]。主要有甾体皂苷类、多糖类、氨基酸类等成分[2]，现代研究表明，这些成分具有抗衰老、抗癌、抗肿瘤、治疗白血病、镇咳、平喘、增强免疫等作用[3-10]。目前天冬的产地加工方法较混乱。天冬传统的采收初加工，主要包括采收、分档、除杂、水洗、煮制、去皮、干燥等步骤[11]。2015版《中国药典》天冬有蒸或煮两种产地加工方式，但缺乏明确的参数。有研究表明，最佳煮制时间为15min[12]；也有研究显示，煮制40min饮片得率较高，水量对天冬浸出物有影响，干燥方式和温度不同，得到的药材质量也有较大差别[13]。前期实验优化了贵州产天冬的蒸制工艺，本研究进一步对贵州产天冬的煮制工艺影响因素进行研究。

1 材料

1.1 仪器

紫外-可见分光光度计（型号GBC cintra 20，澳大利亚照生公司）；ME204E型万分之一电子天平（上海梅特勒-托利多）；十万分之一电子天平（型号AUW220D，岛津）；旋转式蒸发仪（型号RE-52A，上海亚荣）；超声清洗机（型号 HS10260D，天津恒奥）；电热鼓风干燥箱（型号CS101-1C，重庆四达）。

1.2 试剂与试药

天冬药材采自贵州省安顺市关岭县，经贵阳中医学院生药教研室周汉华老师鉴定为百合科植物天冬Asparagus cochinensis（Lour.） Merr.的根。菝葜皂苷元对照品（批号：110744-200509）、葡萄糖对照品（批号110833-200503）均购自中国药品生物制品检定所；水为蒸馏水；其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 单因素考察

以天冬总皂苷、多糖为指标，考察煮制时间、水量对天冬煮制工艺的影响。

（1）不同煮制时间 取净制的鲜天冬8份，每份200g，分别置锅中煮5、10、15、20、25、30、35、40min后，取出剥皮，用清水漂洗，置60℃烘箱中烘至全干，进行粉碎，过80目筛。测定总皂苷、多糖。

（2）不同煮制水量 取净制的鲜天冬10份，每份200g，分别用2、4、6、8、10、12、14、16、18、20倍水置锅中煮15min，取出剥皮，用清水漂洗，置60℃烘箱中烘至全干，进行粉碎，过80目筛。测定总皂苷、多糖。

2.2 对照品溶液制备

（1）总皂苷 将菝葜皂苷元对照品置于五氧化二磷减压干燥器中，干燥12 h后，精密称取12.70 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇制成0.2540 mg/mL的溶液。

（2）多糖 精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，置于100 mL容量瓶中，加水溶解稀释，制成0.6 mg/mL的溶液。

2.3 各指标物质提取

（1）总皂苷 精密称取天冬粉末，约0.5g，置于索氏提取器内，加100 mL氯仿脱脂2h，挥干溶剂，再加甲醇100 mL，80℃回流提取至无色，取出药包，回收甲醇，加10mL蒸馏水溶解，用水饱和的正丁醇萃取4次（正丁醇分别为15mL、10mL、10mL、10mL），合并正丁醇部分，用正丁醇饱和的水洗涤，减压回收至干，残渣用甲醇溶液定容至100mL，即可。

（2）多糖 精密称取天冬粉末，约0.25 g，置于烧瓶中，加入80%乙醇100mL，80℃回流提取2h，趁热过滤，挥干溶剂，将滤渣和滤纸同置于烧瓶中，加80mL蒸馏水，提取2次，每次2h，合并滤液，置于200mL容量瓶中，定容，摇匀即可。

2.4 各指标含量测定法

（1）总皂苷 精密吸取各总皂苷元提取液1 mL于显色管中，挥干甲醇，加10 mL高氯酸，摇匀，在65℃水浴加热显色15 min后取出，在冰水浴中冷却15 min，于紫外可见分光光度计波长310 nm处测定吸光度。

（2）多糖 精密吸取各多糖提取溶液2 mL，在冰水浴中缓缓滴加0.2%的蒽酮-硫酸溶液8 mL，摇匀，再置于沸水浴中保持10 min后取出，立即置于冰水浴中保温10 min，于紫外可见分光光度计波长620nm处测定吸光度。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察

（1）总皂苷 精密吸取对照品溶液0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL、1.3 mL、1.5 mL、1.7 mL于比色管中，挥干溶剂，加高氯酸10 mL，摇匀，65℃水浴加热显色15min，取出，在冰水浴中冷却15min，摇匀，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在310nm处测定吸收值。以菝葜皂苷元质量（mg）为横坐标，吸收值A为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y =1.6145x- 0.015，r = 0.9992，菝葜皂苷元在0.1778～ 0.4318 mg/mL范围内具有良好的线性关系。

（2）多糖 精密吸取葡萄糖对照品溶液1.5 mL、1.8 mL、2.1 mL、2.4 mL、3.0 mL、3.3 mL，分别置于25 mL比色管中，定容，分别精密量取2mL于比色管中，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8mL，摇匀，再置沸水浴中保持10分钟后取出，立即置冰水浴中保温10分钟，空白组用2 mL蒸馏水+8 mL0.2%蒽酮-硫酸，于620nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：A=5.953C+0.0708，r=0.9991，结果表明葡萄糖对照品在0.036～0.0792mg/mL线性关系良好。

2.5.2 精密度试验

精密吸取供试品溶液，按2.4项下的显色条件进行测定。多糖和总皂苷吸光度的RSD值分别为1.65%，2.35%，结果表明，仪器精密度良好。

2.5.3 重复性试验

精密称取同一处理方法的天冬粉末6份，按2.3项制备供试品溶液，按2.4项下的显色条件对多糖，总皂苷进行测定。多糖和总皂苷吸光度的RSD值分别为2.87%，2.62%，结果表明，测定方法重现性良好。

2.5.4 稳定性试验

精密称取同一处理方法的天冬粉末1份，按2.3项制备供试品溶液，按2.4项下的显色条件，分别在0 h、0.5 h、1.5h、2 h、2.5 h、3 h、3.5 h、4 h、4.5 h和5 h进行吸光度测定，记录试验结果。多糖和总皂苷吸光度的RSD值分别为1.95%，1.38%，结果表明，供试品溶液在5 h内稳定。

2.5.5 加样回收率试验

（1）多糖 精密称取也知含量的天冬样品6份于烧瓶中，每份约0.125 g。精密称取葡萄糖对照品0.15550 g，用蒸馏水定容到25 mL，即得6.22 mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取葡萄糖对照品溶液1毫升，加入上述每个烧瓶中，按2.3项方法制备供试溶液，按“2.4”项进行测定。实验平均回收率为100.42%，RSD为2.24%。

（2）总皂苷，精密称取已知含量的天冬样品6份于烧瓶中，每份约0.25g。精密称取菝葜皂苷元对照品0.09170g，用甲醇定容到50毫升，即得1.834mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取菝葜皂苷元对照品溶液加8毫升入上述每个烧瓶中，按“2.3”项制备样品溶液，按“2.4”项下条件进行测定，计算回收率。加样回收率试验平均回收率为101.45%，RSD为2.24%。

2.6 不同煮制时间对天冬多糖、总皂苷含量的影响

精密称取2.1项预备好的样品粉末适量，按2.3项制备不同煮制时间的供试品溶液。按2.4项显色条件，测定吸光度，计算各样品中天冬总皂苷、多糖的含量，结果见表1。

表1 不同煮制时间天冬总皂苷、多糖含量（n=3)

经方差分析，煮制不同时间天冬总皂苷含量的P值为0.002，有显著性差异。煮制不同时间天冬多糖含量的P值为0.06，无显著性差异。煮制40min天冬总皂苷含量最高，煮制35min天冬多糖含量最高。煮制35min和40min天冬总皂苷含量有显著性差异。结果表明，以天冬总皂苷、多糖含量为指标，煮制40min最佳。

2.7 不同煮制水量对天冬多糖、总皂苷含量的影响

精密称取2.1项预备好的样品粉末适量，按2.3项制备不同煮制水量的供试品溶液。按2.4项显色条件，测定吸光度，计算各样品中天冬总皂苷、多糖的含量，结果见表2。

表2 不同煮制水量天冬总皂苷、多糖含量（n=3）

经方差分析，不同煮制水量的天冬总皂苷和多糖含量的P值分别为0.001、0.000，有显著性差异。6倍煮制水量天冬总皂苷含量最高，8倍煮制水量天冬多糖含量最高。6倍和8煮制水量天冬总皂苷含量无显著性差异，但多糖含量有显著性差异。结果表明，以天冬总皂苷、多糖含量为指标，以8倍煮制水量最佳。

3 讨论

实验以天冬多糖、总皂苷含量为指标，考察了不同煮制时间、水量对贵州产天冬的影响，结果表明以8倍水量煮制或煮制40min时，天冬多糖和总皂苷含量均较高。同时以天冬多糖为指标进行实验，实验结果显示：直接干燥生品与未剥皮煮、未剥皮蒸比较有显著性差异，经蒸、煮后，天冬多糖含量较直接干燥生品高；未剥皮煮和剥皮煮有显著性差异，未剥皮煮含量较剥皮煮高，但未对总皂苷作研究；前期实验证明温度为80℃下烘干得到的天冬多糖的含量最高。

研究结果表明不同煮制时间、水量、是否剥皮、干燥温度等因素对贵州产天冬的多糖和总皂苷含量均有影响。由于试验条件和试验时间的限制，不同煮制时间、煮制水量、是否剥皮、干燥方式及温度等对贵州天冬的浸出物、其它有效成分及药效等的影响，还有待进一步研究。下一步将用正交和综合评分法优选贵州产天冬的煮制工艺。

注：方法学考察和指标成分提取，测定来源于前期实验。