张献辉，刘 蕾，尚宁宁

（1.河北科技师范学院，河北 秦皇岛 066000；2.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154000）

血乳酸、血清尿素氮及肝糖原水平等参数的参考价值较高，能够有效体现运动过程中物质代谢现象及能量物质状态[1]。此外，和疲劳形成机理存在较大关联性的生物化学参数能够有效反映某一保健食品或是抗疲劳的具体成效。郝瑞芳以裂褶菌子实体干粉试验组和试验组和裂褶菌发酵液试验组饲喂小鼠，检测裂褶菌子实体干粉和发酵液对小鼠肝糖原含量、肌糖原含量、唬拍酸脱氢酶活力、乳酸脱氢酶活力、血清尿素氮含量及血乳酸含量的影响[1]。

1 材料和方法

1.1 裂褶菌子实体干粉

人工栽培的裂褶菌子实体干粉，由云南农业大学食用菌研究所提供。

1.2 裂褶菌发酵液

液体培养基配方：葡萄糖20.0 g，蛋白胨2 g，KH2PO41.0 g，MgSO40.5 g，酵母浸膏 3.0 g，蒸馏水1 000 mL，pH 6。

裂褶菌菌种，由云南农业大学食用菌研究所提供。500 mL培养瓶培养基装量335 mL，接种量为1%，25℃静置培养2 d，然后置于摇床160 r·min-1振荡培养，直至菌丝球充满整个培养基（约7天）。培养结束后，发酵液（含菌丝体） 4℃冰箱冷藏待用。

1.3 试验方法

1.3.1 实验动物

40只健康昆明种小鼠，平均体重（20±2）g，由山西医科大学实验动物中心提供。饲喂基础饲料1周后，分为4组（分笼饲养），每组、10只，雌雄各半。试验I组：基础饲料95%，裂褶菌子实体干粉5%，饮自来水；试验Ⅱ组：基础饲料90%，裂褶菌子实体干粉10%，饮自来水；试验Ⅲ组：基础饲料100%，用裂褶菌发酵液的稀释液（发酵液：水比例为1∶1）代替自来水饮用；对照组（CK）：基础饲料100%，饮自来水。每组每日早晚各喂一次，自由饮水[2]。

1.3.2 体重指标检测

在开始试验的时候开始计算，6 d进行一次小鼠体重测定，如实将相关数据记录下来。

1.3.3 负重游泳测试

最后一次给样30 min之后，将小鼠体重5%的重物系在其尾根部，并且准备一个水深超过30 cm、温度为24℃～26℃的游泳箱，小鼠就在其中展开负重游泳运动，让小鼠四肢持续性运动，借助秒表将小鼠从开始入水到头部完全呈现入水状态并且8 s未从水面浮出的时长记录下来，这就是小鼠力竭游泳的实际时长。

1.3.4 血乳酸测定

最后一次给受试样品30 min之后，不负重游泳600 s之后停止，在游泳之前及之后、休息20 min之后进行血液样本采集，并且进行SOIL测定，主要是借助全血乳酸试剂盒进行乳酸水平的检测[3]。

1.3.5 血尿素氮检测

最后一次给样30 min之后，在30℃的水箱内以零负重的方式进行游泳运动，时间是1.5 h，在1 h的休息之后，采取拔眼球的方式进行血液采集，在不使用抗凝剂的情况下，在4℃的冷藏箱内进行存储，存储时间是3 h，采取离心措施，转速是2 000 r·min-1，共进行15 min的离心操作，进而获得血清，采取二乙酞-肟法完成检测[4]。

表1 血尿素氮测试盒测定步骤Tab.1 Determination steps of blood urea nitrogen test box

彻底混匀，以沸水浴的方式进行15 min的水浴，以双蒸水为溶剂进行调零，并且检测520 nm的吸光度值。

1.3.6 肝糖原检测

借助蒽铜法进行肝糖原的测定，若是加热蒽铜，蒽铜就会和游离糖或是多糖反应，溶液颜色也会因此改变，变成蓝绿色，620 nm能检测到最大吸收峰，因此能采取比色技术分析糖原水平[1]。

1.3.7 数据分析与结果评估

游泳时长、血乳酸水平、血尿素氮水平及肝糖原水平都属于计量数据，借助方差分析的方法处理计量资料，以SPSS 19.0分析相关数据，并且以（±s）呈现。负重游泳测试数据是阳性，血乳酸水平、血尿素氮水平及肝糖原水平为任意一个数值，若结果仍为阳性，就能表明此受试样品的治疗作用中包括改善疲劳。

2 结果及分析

2.1 裂褶菌对小鼠血乳酸含量的影响

试验I组、试验Ⅱ组小鼠泳后20 min，其LD含量极显著低于对照组小鼠，试验Ⅲ组小鼠LD含量显著低于对照组小鼠；泳后50min，试验I组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组小鼠的LD含量均极显著低于对照组小鼠，详见表2。

由表2可知，小鼠停止游泳后20 min～50 min，试验I组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组的血乳酸消除速率分别比对照组提高75%、83%和67%，说明裂褶菌具有极显著提高LD消除速率的作用。

2.2 负重游泳试验结果分析

负重游泳试验结果见表3。

如表3所示，低、中及高剂量组相对于对照组而言，游泳时长分别提升了16.01%、79.66%、17.68%。并且相对于对照组而言，中剂量组显著提升（P<0.05）。

表2 褶菌对小鼠血乳酸含量的影响Tab.2 Effect of pleated bacteria on blood lactate content in mice

表3 负重游泳试验结果Tab.3 Experimental results of weight-bearing swimming

I组及Ⅱ组小鼠游泳时长虽然得到提升，可是相对于对照组而言，这两组的提升并不存在明显的差异。这就表示裂褶菌可以使得小鼠运动耐力得到强化，并能够因此使得运动时长得到延长。多糖能够借助机体糖储备水平的提升，使得运动功能增强，而运动疲劳也能因此改善，此外，还能够使得运动期间对蛋白质的过度利用效应降低。

2.3 生化指标检测结果分析

试验小鼠的生化指标测定结果见表4。

表4 生化指标测定结果Tab.4 Determination results of biochemical indexes

由表4可知，相对于阴性对照组而言，Ⅱ组相关参数的水平与对照组相比，差异并不明显；Ⅲ组内血乳酸水平与肝糖原水平，相对于对照组来说，差异存在统计学研究价值（P<0.05），血尿素氮水平相对于对照组而言，差异存在统计学研究价值（P<0.01）；高剂量组血尿素氮水平相对于对照组来说，差异存在统计学研究价值（P<0.05）。

血乳酸在机体供能环节中发挥关键性作用，糖酵解及有氧代谢期间都会合成血乳酸，并且能够借助糖异生产生糖，因此实现能量供给。剧烈运动时间若是相对较长，机体就会处于氧气相对缺乏的状态，这就会促进糖酵解，并因此使得乳酸水平显著提升，体内乳酸含量也会显著升高，内环境的稳定性也会因此得不到保障；乳酸出现严重的堆积现象，而肌肉内的H+及Pi水平明显提升，机体的pH就会显著降低，糖酵解或是其他代谢方式也会因此受到影响，体内代谢也因此会出现失衡的现象，机体就会出现疲劳。

3 结论

试验I组小鼠抗疲劳效果优于试验Ⅱ组，说明食用裂褶茵的最佳剂量低于10%，超过最佳剂量反而影响裂褶菌在小鼠体内的消化和吸收，最佳剂量还有待于进一步的试验研究。

另外，小鼠食用裂褶菌发酵液的抗疲劳效果较食用子实体干粉的稍差一些，原因可能是由于饮用发酵液的小鼠对裂褶菌有效成分的吸收比食用子实体干粉混合饲料的差，故而作用效果不明显，如果对小鼠采取灌胃，效果将会更好。