王璐璐，李雪锋，周莹，刘杰，孙哲

（1.国家兽用药品工程研究中心河南洛阳 471000；2.洛阳中科基因检测诊断中心有限公司河南洛阳 471000）

鸭关节炎又称鸭关节炎综合征，一般有多种病原菌，多数为饲养方式不当而引起多种病原菌感染，致病主要病原为鸭疫里默氏杆菌等[1]，其次还有大肠杆菌和链球菌等[2]。病鸭以关节肿大为主，其中以跗关节发病率最高，其次是膝关节。剖检后在肿胀的关节囊内，积有大量炎性渗出物，渗出液混浊，混有纤维素性物质,有时混有血液，呈红褐色，病程较长，呈渗出性坏死性病变，积蓄物呈灰黄色干酪样。

鸭是自然好发淀粉样变的动物[3]。目前，淀粉样病变依然是鸭的一种常见疾病，该病受环境、饲养管理等影响较大，如大肠杆菌的内毒素引发慢性中毒、年龄、遗传、鸭的适应性和行为、饲养管理、营养失调等[4]。临床中常见的淀粉样变性属于继发性淀粉样病变，即淀粉样变性是继发于一些长期伴有组织破坏的慢性炎症性疾病，如关节炎、骨髓炎等其他炎症疾病。目前未见关于鸭疫里默氏杆菌继发引起鸭淀粉样病变的报道，但可共同引起鸭关节炎的大肠杆菌被普遍认为可引发鸭系统性淀粉样病变[5-6]。

本试验旨在通过对2019 年8 月河南省某鸭场病鸭经过剖检、细菌学和病理学的方法，对病鸭进行病理学诊断，并确定引起鸭发病的原因，为临床治疗提供帮助。

1 材料和方法

1.1 试验材料

河南省某鸭场送检的4 只27～43 周龄病鸭，临床表现为单侧关节肿大、瘸腿症状，鸭场死亡鸭群中，瘸腿症状占60%。

1.2 主要试剂

LEAGENE（改良Highman 刚果红法）试剂盒（货号：DG0023）；胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），由青岛海博试剂有限公司提供；革兰氏染色试剂，购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3 病理学检测

对病鸭进行颈静脉放血处死解剖，病变部位组织（肝、脾、肾、关节、心、肺和输卵管）用10%中性福尔马林固定3～5d 后，按1cm×1cm×3mm 的大小对肝、脾、肾、关节、心、肺和输卵管取材，在全自动脱水机中脱水浸蜡；然后使用包埋机进行包埋，待蜡块凝固脱模后对其冷冻至合适硬度开始切片，切片厚度为3mm。对组织切片分别进行H.E.染色和刚果红染色（改良Highman 刚果红法）。

1.4 刚果红染色

组织切片染色前恢复至室温，置于染色架中，常规脱蜡至蒸馏水；将组织切片置于湿盒，滴加适量改良Highman 染色液，室温染色20min；在组织切片上滴加或浸入分化液染色缸中，分化2s；自来水冲洗5min，洗去染色液及分化液；Mayer 苏木素染色液衬染2min；自来水洗去未结合的苏木素，置自来水中返蓝2min；逐级常规无水乙醇脱水，二甲苯透明；中性树胶封片剂封片。

1.5 细菌分离

无菌抽取关节肿大处渗出物，对其进行细菌接种培养（TSA+血清），37℃温箱中培养24h；肝脏研磨后液体接种于SC 培养基，37℃，恒温摇床200rpm 中培养24h，接着将SC 液体接种到HE培养基上于37℃温箱中继续培养24h；观察菌落形态，挑取单个菌落进行纯化培养，纯化培养后菌株进行革兰氏染色镜检和常规细菌生化试验。

2 结果

2.1 解剖学观察

解剖学检测：肝脏肿大，表面光滑，质地坚硬，存在明显可见黄绿色病变区（图1a）；脾脏表面有明显不规则灰白区（图1b）；腿部关节肿大，有干酪样渗出物（图1c）；腹腔积液；皮下胶冻样附着物；胸气囊和腹气囊有干酪样渗出物。

2.2 细菌分离结果

关节液接种的TSA+血清培养基中(图2a)，生长出白色奶油状大菌落，对该平板上细菌进行革兰氏染色，可见细菌为革兰氏阴性、短杆状、两极着染（图2c），对分离到的细菌进行基因测序后，鉴定为单一的鸭疫里默氏杆菌。在肝脏研磨液接种的HE 培养基中，生长出黄色菌落（图2b），触酶试验呈阳性，氧化酶试验呈阴性，对该平板上菌落进行革兰氏染色试验（图2d），可见细菌为粗短、两端钝圆的小杆菌，多单个散在，个别成双排列，无芽孢，革兰氏阴性。

2.3 组织学观察

观察发现，淀粉样物质在病鸭肝脏内沉积最多，其次为脾脏和肾脏，其他组织未见淀粉样变。肝脏：肝窦变窄，甚至消失；不可见明显的肝细胞索，且均质红染物质沉着于肝细胞索。刚果红染色后发现，砖红色物质呈条索状取代了大部分肝细胞索（图1d）。脾脏：脾红髓内有大量呈团块状或条索状砖红色物质沉着于脾髓细胞和淋巴细胞之间，部分淋巴细胞发生萎缩（图1e）。脾红髓髓窦内出血、大量异嗜性粒细胞浸润（图1h）。关节：关节内部血管周围有部分颗粒状砖红色物质沉着（图1f），关节皮肤内大量坏死崩解的物质并大量异嗜性粒细胞浸润（图1i），另外，部分病鸭肾小管中发现砖红色物质，说明淀粉样变性病变在肾脏中未呈现较严重的病理变化，对肾脏的损伤较小。

3 讨论

引起鸭关节炎的病原菌有许多，其中包括鸭疫里默氏杆菌、葡萄球菌和大肠杆菌等。该病原引起的鸭里氏杆菌病根据病程长短可分为最急性型、急性型、亚急性型或慢性型，亚急性型或慢性型一般感染4～7 周龄雏鸭，能长期存活，但发育不良，消瘦；病鸭除表现上述症状外出现头颈歪斜，转圈或倒退，病鸭跛行。因此，送检鸭虽为27 周龄，可能是鸭疫里默氏杆菌在病鸭中呈慢性经过。

淀粉样变性一般认为其是蛋白质代谢障碍的一种产物，与全身免疫反应有关，是有网状内皮细胞所产生，大致分为3 种：AA 淀粉样变性、AL 淀粉样变性和Aβ 2M 淀粉样变性。国内有大量关于鸭全身性淀粉样变性的报道主要为AA 淀粉样变性，在慢性炎症反应过程中，血清中会出现一种大分子量的α 球蛋白，称为血清淀粉样蛋白（serumamyloid A，SAA），它是AA 的前体。循环血液中大分子的SAA 可能经巨噬细胞的溶酶体酶的水解而生成AA沉着于组织中，形成淀粉样物质沉着于组织中。其中，以凌育燊[8]团队关于鸭系统性淀粉样变研究的时间最早，病鸭全身病理变化较全面，他们认为鸭系统性淀粉样变病属于继发性疾病，细菌及其内毒素能成功诱发该病。另外，曹洪志等[9]认为鸭系统性淀粉样变的发生与大肠杆菌的毒素引发慢性中毒、年龄、遗传、鸭的适应性和行为、饲养管理、营养失调有关。

图2 细菌培养

从病鸭的外观，最明显的观察到病鸭呈跛行状态，关节肿大；肛门周围粪便污染；进行病理剖检后，观察到肝脏肿大，表面光滑，质地坚硬，可见较明显的黄绿色病变区。关节渗出物接种培养，发现为较单一的鸭疫里默氏杆菌病原感染，另外在病理切片中观察到多器官的淀粉样变性，对肝脏病变区进行细菌分离，得到引起鸭全身性淀粉样病变大肠杆菌的菌落[7]。经过对鸭淀粉样病变的对比，本批病鸭多以鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌混合感染引起的关节炎为主要发病原因，继发的大肠杆菌感染引起的鸭系统性淀粉样变性为并发症状。

4 防治措施

鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌引起鸭场的感染，首先需要加强鸭场饲养管理，经常消毒通风，勤换垫料，防潮防湿，潮湿的环境极易滋生细菌；另外，采用“全进全出”的方法，预防传染病的发生。其次进行药物预防，可在轻微感染和症状较轻的鸭群中使用广谱抗菌药物如卡那霉素、土霉素等与饲料或饮用水混匀一起饲喂。总之，要树立正确的饲养理念，不断加强鸭舍的日常管理工作。