陈 蓉, 王如坤, 李 伟, 黄立明, 曹嘉懿*, 周成旭, 李 双,, 徐继林

剧毒卡罗藻GM5株中标志性毒素4,5-dihydro-KmTx2的色谱制备

陈 蓉1, 王如坤2, 李 伟1, 黄立明1, 曹嘉懿1*, 周成旭1, 李 双1,2, 徐继林1

（1.宁波大学 应用海洋生物技术教育部重点实验室, 浙江 宁波 315832; 2.宁波海关 技术中心, 浙江 宁波 315040）

建立了剧毒卡罗藻GM5株中标志性毒素4,5-dihydro-KmTx2的分离纯化体系, 通过高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)对其纯化效果进行评价. 过滤后的培养液经大型固相萃取柱(YMC-GEL ODS-A-HG, 80 cm×10 cm, 12 nm, S-50 μm)进行富集, 依次用体积分数为10%、40%和60%的甲醇溶液进行淋洗, 体积分数为80%的甲醇溶液进行洗脱, 得到目标化合物粗提液(纯度为51.3％). 采用半制备型高效液相色谱技术进一步分离纯化, 使得目标化合物纯度高达93.2％. 该方法提取及纯化效率高, 可操作性强, 可以为4,5-dihydro- KmTx2的规模化生产及功能活性研究提供技术支持.

液相色谱; 四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱; 4,5-dihydro-KmTx2; 剧毒卡罗藻GM5株

近些年卡罗藻()引起的赤潮在世界范围内频发, 研究者们对卡罗藻的关注度越来越高. 周成旭等[1]首次对中国东海分离的一株卡罗藻进行了相关毒性检测, 结果显示该藻细胞内外提取物均表现出不同强度的生物毒性. 卡罗藻中分离得到的生物毒素称为卡罗藻毒素(Karlotoxins, 简称KmTxs), 具有溶血性、鱼毒性、细胞毒性和胚胎毒性等多种毒性特征[2]. 剧毒卡罗藻产生的这类毒素, 不仅可以防御袭击[3], 还能麻痹生物, 从而进行捕食等[4]. 由于卡罗藻毒素独特的化学结构和高生物活性, 已成为国内……