周家仙 张伟芬 周桂娇

结核病(TB)为呼吸道传染病,早期快速诊断已经成为控制结核病的关键因素[1-3]。结核潜伏感染(LTBI)是宿主虽已被结核分枝杆菌感染但还未发病的一种亚临床状态,痰涂片阴性和(或)放射检查无阳性征象,细菌成休眠状态,故临床早期诊断该病具有较大难度。机体免疫力低下时,LTB可发展成为活动性肺结核病或其他脏器的结核病变[4-5]。本研究将T-SPOT.TB应用于检测护理人员的LTBI现状,目的在于了解护理人员结核分枝杆菌潜伏感染情况以及应用T-SPOT.TB检测LTBI的临床优势，降低护理人员结核病感染概率，避免医院交叉感染的发生。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 将我院各科室工作超过1年的女性护理人员共计201名作为研究对象,内科组82名中，呼吸、消化、神经、肾脏、心脏及内分泌科分别为25，21，18，9，7，2名。外科组85名中,心胸外科、骨科、普外科、泌尿外科、神经外科分别为29，20，19，10，7名。辅助科室34名中,检验科、超声科、药剂科、影像科分别为11，12，6，5名。年龄26～44岁,平均(35.1±4.2)岁；上岗年限≥3年121名,<3年80名。均身体健康,临床表现及影像学检测均未见活动性肺结核症状。排除应用免疫抑制剂或增强剂及妊娠女性。

1.2 方法 (1)仪器及试剂。采用T-SPOT.TB(UK)检测试剂盒，ESCO二级生物安全柜，5%的CO2细胞培养箱，37 ℃。(2)外周血 T-SPOT. TB试验。真空采血管中置入肝素抗凝剂并采集每位受检者5 ml的外周静脉血，混合摇匀并于4h内予以外周血单个核细胞(PBMC)分离。将抗凝全血依据1：1比例与培养液混合，再依据(2～3)：1比例将被稀释的血氧渐渐加入至Ficoll淋巴细胞分离液上，18 ℃下以每分钟1000 r离心，连续22 min以分离PBMC。予以离心洗涤并做好相关数据记录，最后将细胞量调整到2.5×106/ml。取出T-SPOT.TB培养板，将温度调整至室温并做好标识，于每个样本的板条处分别加入50 μl的阴性对照AIM-V与阳性对照(PHA)，抗原A与B各50μL。然后再在4个孔内均加入100μL细胞悬液，置于37 ℃5%的CO2细胞培养箱内培养16～20 h。按照顺序分别加入酶标二抗与底物显色液后形成斑点，借助全自动ELISPOT读数仪读取斑点数目。

1.3 结果判定与观察指标[6]试验结果评定：阴性对照斑点数为 0～5个, 任何一个检测孔计数减去阴性孔计数≥6个判断为阳性;如果阴性对照斑点数≥6个, 检测孔斑点数≥2倍阴性对照孔斑点数, 判定为阳性。若阴性对照孔斑点数超过10或阳性对照孔不足20时,则可视T-SPOT. TB结果不明确需复查。如果不符合上述标准,且阳性对照孔显示正常时,测定结果为阴性[7]。观察比较不同科室护理人员T-SPOT.TB检测结果及不同工作年限护理人员T-SPOT. TB阳性结果。

2 结 果

工作年限<3年与工作年限≥3年的受检人员T-SPOT.TB的阳性检出率分别为15.00%与31.40%,差异有统计学意义,且后者阳性检出率明显更高(P<0.05)。不同科室中,工作年限≥3年者其阳性检出率均较工作不足3年者高,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同科室中不同工作年限护理人员T- SPOT. TB

3 讨 论

全国第五次结核流行病学抽样调查结果公布,我国感染人数超过5亿,年发病人数约130万,该病呈进行性发展,已成为重要的公共卫生问题。有研究表明,LTBI人群中,约5%～10%可转化成活动性结核病[8]。LTBI处于亚临床状况,早期诊断有较大难度。其潜伏期为1～2个月,肺部最易引发感染,其他部位如颈淋巴、脑膜等。医院作为LTBI的重要场所,护理人员是与病患接触最为频繁的高危群体,其感染的可能性较大。临床当前诊断TB的实验室方法较多,但敏感性与特异性均不尽如人意，应用组织病理学检测存在创伤且涂片查抄结核杆菌有较高的漏检率。而结核菌素试验(PPD)筛查法由于我国人群卡介苗接种率较高,假阳性率偏高[9-10]。

T-SPOT.TB将特异性抗原靶蛋白6ESAT-6与培养滤液蛋白10(CFP10)作为刺激原,应用酶联免疫斑点技术对是否感染TB进行判定。T-SPOT.TB 是以T细胞免疫应答和γ干扰素浓度变化为依据的测量方式。当人体初次感染结核分枝杆菌后,T 细胞受抗原刺激形成致敏的效应 T淋巴细胞,当人体再次受到该病菌感染时,效应T淋巴细胞会分泌大量γ干扰素,T-SPOT.TB 检查可借助检测受试者γ干扰素的浓度变化或单细胞水平γ干扰素的细胞数目,确定结核分枝杆菌的感染情况[11]。T-SPOT.TB不仅诊断效率、灵敏度较高,还不受机体免疫抑制，不受分枝杆菌感染条件的影响,试验操作简便,费用较低[12-14]。该方法中的两种抗原已经证实均不存在于全部卡介苗菌株及多数非结核分期杆菌中,确保了检测结果的高特异性,检测周期仅需在24 h内完成,且具阳性与阴性对照,能检测出免疫功能异常者,从而确保了临床判读的有效性,检测结果也不受是否接种卡介苗的影响。本研究结果发现,所有受检人员中共有53名T-SPOT.TB检测结果为阳性,总潜伏率为26.37%；工作年限<3年与工作年限≥3年的受检人员T-SPOT.TB阳性检出率分别为15.00%与31.40%,差异有统计学意义,且后者阳性检出率明显更高(P<0.05)；不同科室中,工作年限≥3年者其阳性检出率均较工作<3年者高,但差异无统计学意义(P>0.05)。由此可知,综合医院护理人员LTBI率受到工作年限的影响,且工作时间越长受感染的风险越大,而所在科室对其感染风险影响较小。综合性医院虽与TB患者无密切接触,但也应加强对护理人员进行LTBI的防控,尤其关注工作年限较长的护理人员。

总之,常用的结核病实验室的诊断方法难以满足临床早期确诊结核病的需要,T-SPOT.TB检测具有高灵敏度和特异度,能快速、准确地诊断结核病感染,对控制传染源,降低感染率与提升检出率均具重要意义,可作为临床辅助诊断结核病的重要检测方式。