唐 笑， 甘 甜， 周梅华， 代 冰， 刘岱璿

（长沙金域医学检验所，湖南 长沙 410006）

B族链球菌（group B Streptococcus，GBS）是兼性厌氧的革兰阳性菌，同时也是条件致病菌，常定植于直肠和阴道[1]。正常人群感染GBS后并不致病，但孕妇感染GBS后可导致围生期严重感染[2]，增加宫内感染、胎膜早破、早产、产后出血、产褥感染、新生儿感染等风险，还可造成新生儿肺炎、血流感染或脑膜炎等，同时给新生儿神经功能造成损伤[3]。GBS被列为围生期母婴感染的主要致病菌之一[4-5]。本研究旨在分析湖南地区孕妇GBS感染情况，为临床进行早期预防和治疗提供指导，降低孕妇围生期GBS感染风险和新生儿感染的发病率。

1 材料和方法

1.1 样本来源

收集2017年9月—2018年8月湖南省14个地级行政区医疗机构9 205例孕妇直肠拭子及阴道分泌物样本。孕妇年龄16～46岁。

1.2 仪器与试剂

ABI 7500实时荧光PCR仪（美国ABI公司），B族链球菌核酸检测试剂盒[博尔诚（北京）科技有限公司]。

1.3 样本采集和处理

1.3.1 孕妇生殖道分泌物 先拭去阴道过多的分泌物，采用无菌拭子插入阴道内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物，将采集的拭子置于无菌管中，密封送检。

1.3.2 孕妇直肠分泌物 将拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5 cm处，沿肠壁轻轻旋转取得样本，将采集拭子置于无菌管中，密封送检。样本一经送检，尽快检测。

1.3.3 样本存放 待测样本在2～8 ℃保存不超过24 h，-18 ℃以下保存不超过4 d。

1.4 检测方法

1.4.1 提取DNA 取1 mL含有分泌物的0.9%氯化钠溶液至1.5 mL离心管中，15 870×g离心10 min，弃上清，沉淀（如不明显可重复离心），加入1 mL无菌0.9%氯化钠溶液混匀，15 870×g离心5 min，弃上清。沉淀加入50 μL DNA提取液充分混匀，99～100 ℃加热处理10 min，15 870×g离心10 min后提取DNA。

1.4.2 扩增 按样本数量（包含质控）分装GBS聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）反应液，按每管35 μL分装至0.2 mL PCR反应管中，每管加入5 μL样本DNA进行扩增。程序设定为：50 ℃ 2 min；95 ℃ 5 min；95 ℃15 s，60 ℃ 35 s，45个循环。在60 ℃时分别检测FAM通道和HEX通道。

1.4.3 结果分析 阈值设定在空白对照正常扩增曲线的上方，基线设定选择3～5个循环。阴性结果判定：如果FAM通道无循环阈值（cycle threshold，Ct）显示，而HEX通道信号正常（Ct值≤35.00），则该样本为阴性。阳性结果判定：（1）若样本的FAM通道Ct值≤38.00且扩增曲线正常则判定样本为阳性；（2）若样本的Ct值为＞38.00～≤45.00，则对该样本进行复查，如复查结果的Ct值仍为＞38.00～≤45.00或≤38.00，则判定为阳性；如果Ct值不显示且HEX通道信号正常（Ct值≤35.00），则判定为阴性。

1.5 统计学方法

采用 SPSS 20.0软件进行统计分析。计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 直肠样本和阴道样本GBS阳性率比较

9 205例孕妇中有719例GBS阳性，阳性率为7.81%。其中直肠拭子样本5 267例，阳性516例（9.80%）；阴道分泌物样本3 938例，阳性203例（5.15%）；直肠和阴道部位同时阳性548例，阳性率为7.61%（548/7 204）。直肠拭子样本GBS阳性率高于阴道分泌物样本（P＜0.05）。

2.2 不同年龄孕妇GBS阳性率比较

＞39岁孕妇GBS阳性率最高，＜20岁孕妇GBS阳性率最低。见表1。

表1 不同年龄孕妇GBS阳性率

3 讨论

细菌培养是实验室检测GBS的金标准。但是培养法需要分离细菌，检测耗时长，操作复杂，存在一定程度的漏检可能。本研究采用实时荧光定量PCR方法检测病原体核酸，能快速、灵敏、准确地筛查出GBS。本研究中直肠拭子样本阳性率（9.80%）明显高于阴道分泌物样本（5.15%）（P＜0.05），与栗艳芳等[6]的报道一致，说明不同部位取材对于GBS的阳性率有影响。分析原因可能是直肠的环境相对于弱酸性的阴道环境更利于GBS生长繁殖所致[7]。

本研究分析了不同年龄组GBS检查阳性率，发现高龄产妇（≥35岁）的GBS阳性检出率最高，可能与雌激素水平或者免疫力有关。

据文献报道，印度、中国、尼日利亚、美国和印度尼西亚是孕妇GBS定植居前5位的国家[8]。但相关研究结果表明，我国GBS检测阳性率普遍不高，远低于美国疾病预防控制中心统计数据（10%～30%）。对比近几年我国部分地区已报道的GBS筛查情况，发现湖南地区孕妇GBS阳性检出率在国内处于中等水平，低于江西（8.76%）[7]、佛山（10.15%）[9]和秦皇岛（9.50%），高于中山（6.70%）、南京（4.16%）、上海（6.30%）、深圳（4.50%）、常州（4.20%）、呼和浩特（4.80%）[10-16]。

孕妇感染GBS危害较为严重，会导致多种不良妊娠结局，诱发孕妇和新生儿的各种疾病，甚至死亡。欧美地区已广泛开展围生期孕妇GBS感染筛查，但我国重视程度不足，应加大孕妇GBS感染筛查的推广力度，及时采取相应的预防和治疗措施，降低GBS感染发生率，同时建议在条件允许的情况下接种母体GBS疫苗，有效预防妊娠期妇女GBS感染。