鲁珍娥，聂娟，鲁彩彩，柳威，易家玲

（武汉华科大生命科技有限公司，湖北武汉 430223）

随着我国经济的发展和人民生活水平的提高，人们对药品质量的要求也越来越高，而合格的药品需要严格的检测流程和先进的检测方法。其中，高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatog-raphy，HPLC）就是目前最常使用的检测手段，其在所有的药品质量检测技术中运用已较为成熟。而色谱法起初并没有用于药品检测，仅仅是将混合物按不同组分进行分离，一直到20世纪50年代，这种分离手段才开始运用到药品检测中，是当前化学分析过程中应用最普遍的手段之一，其具有很高的分离速度与分离效率，且具有极高的检测灵敏度，近些年来，逐渐成为药品质量控制的重要手段。

1 高效液相色谱的原理和技术条件

高效液相色谱是利用细粒径填料和细内径柱子而形成的一种技术，而色谱柱的性能取决于固定相的颗粒度大小，即颗粒度越大，色谱柱分离速度及效率就越低，反之越高[1]。图1所示为高效液相色谱技术装置示意图。而想要获取更高的分离效能及灵敏度，高效液相色谱技术需要具备以下4个条件[2]：（1）填料应选择使用新型色谱填料，使用杂化颗粒技术将颗粒粒径的大小设定在17 μm；（2）针对长度较长的色谱柱，为了能够保证其流速，应使用高效液相色谱输液泵；（3）为了有助于检测器捕捉到更多色谱峰内的数据，应装置高效液相色谱高速检测器，以确保获取更多的峰面积；（4）自动进样器是高效液相色谱技术中不可或缺的，其能够提高进样速度，加快进样周期，从而保证在使用高效液相色谱法的过程中检测结果不受极端高压波动的影响。

2 高效液相色谱法在药品检验中的应用

2.1 药品含量测定

高效液相色谱法可对原料中各杂质、各成分的含量进行测定[3-4]，特别是遇水化学性质不稳定的物质，如药品吡罗昔康（酰胺类化合物），其能够快速准确可靠地得出检测结论。而针对不同的药品，具体操作流程也存在差异，对于吡罗昔康，为了增强吡罗昔康水溶液的稳定性及溶解性，确保检测结果，需先使用0.01 mol/L的盐酸甲醇溶液；而对于四环素类抗生素，在对其进行测定的过程中，需要使用高效液相色谱法对四环素类抗生素进行组分分离；在对盐酸萘甲唑啉鼻用剂型凝胶中的盐酸萘甲唑啉含量进行测定时，应先将盐酸萘甲唑啉鼻用剂型凝胶中的高分子物质分离出来，常采取乙腈进行析出，以避免高分子物质影响液相柱，从而影响检测结果。

2.2 有关物质检查

高效液相色谱法还可用于检查药物生产制造及运输使用过程中产生的物质，通常在此过程中产生的物质含量极其微小，为了保证产生的物质不对药品的安全性造成影响，必须加强对这些物质的检查。而高效液相色谱法具有极高的灵敏度，即便对含量微小的有关物质，也能获取准确的检测结果。例如，制备和使用盐酸特拉唑嗪片过程中，使用高效液相色谱法对其进行检测，检测范围可达0.05 μg/mL，而采用常规检测法检测精确度仅有0.025 mg/mL。

2.3 中药成分检验

中药是一个成分较为复杂的药物体系，其中含有多种微量元素及有机成分。随着近些年来我国中药产业的不断崛起，控制中药质量尤为重要。因此，需要对中药的成分进行检测。通常控制中药质量常采用薄层色谱法进行中药成分检测，但该方法除了具有一定的实验难度外，还容易受到外界环境因素的影响，进而造成检测结果不准确。目前，高效液相色谱法在药物检测中应用广泛，当前已替代了常规中药成分检测所使用的薄层色谱法，经国内外学者研究证明，使用该方法所检测出的结果准确可靠，操作方法简便。

2.4 抗生素类药品中降解产物及聚合物的检验

高效液相色谱法还能对抗生素类药品进行检验。在临床上，抗生素类药物得到了广泛应用，但同时也伴随着诸多不良反应的产生，造成这种问题的原因之一就是生产抗生素类药物的原料中含有杂质。为了减小或消除使用抗生素类药物过程中产生的不良反应，必须对原料中的杂质进行控制。而相关研究证明，高效液相色谱法的使用能够在较短时间内分离出原料中产生的降解产物及聚合物等杂质，从而对其进行限量控制，保障抗生素类药物的药效，减少不良反应的发生。

3 高效液相色谱新技术的发展

目前发展的高效液相色谱新技术包括高效液相色谱法-蒸发光检测技术（HPLC-ELSD）、高效液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）及快速高效液相色谱技术等[5]。（1）HPLC-ELSD技术将蒸发光检测技术与高效液相色谱技术相结合，解决了以往受限于含发色团的化合物检测范围等问题，从而大大提高了高效液相色谱技术的使用范围。（2）LC-MS技术是将质谱仪运用到液相色谱技术上，能够达到高效分离复杂有机混合物的目的，其主要是利用了质谱仪强大的组分鉴定能力。（3）快速高效液相色谱技术主要是在高效液相色谱技术的基础上对色谱参数进行了优化，并对柱子进行了升级与改造，使柱子更耐高压，增加了柱效，以此来使得高效液相色谱技术更快速高效，缩短检测时间。

4 实际案例应用

以复方氨基酸注射液中焦谷氨酸含量的测定为例，说明高效液相色谱技术在药品检验中的应用效果。人体蛋白质吸收不足时，机体将由于氨基酸过低而出现新陈代谢障碍，此时使用药物复方氨基酸注射液将有助于患者吸收补充蛋白质，改善术后营养状况。该药物根据含氨基酸总量可分为5%和12%两种规格，其中含L-谷氨酸含量为0.75 mg/mL和1.80 mg/mL[6]。由于在产品的制备过程中需经过高温环境，因此，容易造成药物中产生焦谷氨酸，可以选用高效液相色谱技术对复方氨基酸注射液中焦谷氨酸的含量进行测定。

在测定过程中，需对色谱条件及测定方法进行优化。色谱柱的型号选择为Agilent ZORBAXSB—C18，该色谱柱具有较强的耐酸性，有助于分离样品中的不同组分峰，并且要求柱温不能太高，这是由于较低柱温有助于柱效的提高。为了达到最佳的分离效果，将pH设定为1.6。测定过程中直接对样品进行测定，省去了样品过柱环节，该过程能够减少成分含量的降低，使测定结果更加准确可靠。

5 结语

高效液相色谱技术在药品检测中发挥着重要作用，能够应用到药品含量、中药成分组成及抗生素类药品检测方面，并对药物在生产制造及运输使用过程中产生的有关物质进行检测。而随着科技发展，HPLC-ELSD、LC-MS、快速高效液相色谱等技术的出现，促进了药品检测速度及效率的进一步提高，药品检测结果更加准确，使得药品质量控制得到了加强。如今，便携式理念被欧美等发达国家检验设备公司引入超高效液相色谱领域，其作为经典技术的传承，实现了技术的革新性突破，令应用场景更加多元化，将更加拓展与提升药品质量检验的水平，同时降低检验成本。