董学花 刘莉园 全吉淑 尹学哲

【摘 要】目的：研究草苁蓉环烯醚萜苷（IGBR）抑制人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化（EMT）的相关机制。方法：1）将SMMC-7721细胞分为3组，对照组、模型组、IGBR组，对照组给予DMEM培养液，模型组给予浓度为10 ng/mL的TGF-β1造模，IGBR组给予浓度为10 ng/mL的TGF-β1诱导上皮-间质转化（EMT）模型，再给予浓度为500 mg/mL的IGBR造模。2）对三组模型进行苏木素染色观察细胞形态变化，MTT法检测细胞黏附能力，Western blot检测Vimentin、Snail蛋白表达，免疫荧光检测E-cadherin在细胞中表达情况。结果：与对照组比较，模型组TGF-β1诱导SMMC-7721细胞数量增多（P<0.01），与模型组比较，IGBR组细胞数量减少（P<0.01）;与模型组比较，IGBR组SMMC-7721细胞黏附能力降低（P<0.01）;与对照组比较，模型组Vimentin、Snail蛋白表达上调（P<0.05），与模型组比较，IGBR组Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.05）;与对照组比较，模型组E-cadherin荧光强度减弱，与模型组比较，IGBR组E-cadherin荧光强度增强。结论：IGBR可以抑制SMMC-7721细胞发生上皮-间质转化，其机制与Vimentin、Snail蛋白表达降低，E-cadherin表达上调有关。

【关键词】草苁蓉环烯醚萜苷;肝癌;上皮-间质转化

【中图分类号】R285 【文献标识码】A【文章编号】1002-8714（2020）01-0123-01

肝癌以原发性肝癌多见，肝癌发病率居第六位，死亡率为第三位[1]。目前肝癌的转移性强，其治愈率低，效果较差，肝细胞癌的转移与上皮-间充质细胞转化密切相关[2]。EMT是上皮细胞丧失上皮特性，获得间质细胞表型的生物过程，包括细胞形态和标记蛋白的表达[3]。

1 材料与方法

1.1材料与仪器

IGBR由延边大学基础医学院生化教研室全吉淑教授惠赠;IGBR主要由从草苁蓉中提取，人肝癌细胞SMMC-7721细胞由中国科学院上海生命科学院研究院提供;胎牛血清美国Gibco公司;兔抗人β-actin抗体、兔抗人E-cadherin抗体和鼠抗人Vimentin、Snail抗体购于Cell Signaling Technology公司;兔二抗北京中杉金桥公司;无菌超净台BIOAIR公司;cytation5多功能成像;仪全自动酶标仪（美国Bio Tek公司）;凝胶显像仪美国Protein Simple公司;CO2培养箱Thermo公司;IX70-1120倒置显微镜OLYMPUS公司。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养  将SMMC-7721细胞置于37 ℃、5% CO2恒温培养箱中培养。DMEM培养液中加入10 %胎牛血清、100 U nit/mL青霉素、100 mg/mL链霉素，，每2～3 d传代一次，取对数生长期（7 d）细胞进行实验。

1.2.2造模方法 1）随机分为3组，对照组、模型组、IGBR 组。对照组给予DMEM进行造模，模型组给予浓度为10 ng/mL的TGF-β1进行造模;IGBR 组给予浓度为10 ng/mL 的TGF-β1诱导形成EMT模型，模型成功后再给予浓度为500 mg/mL的 IGBR对其进行造模。2）评估造模成功的方法：显微镜下观察细胞形态学变化。IGBR 组细胞给予浓度为10 ng/mL的TGF-β1诱导48 h后即形成EMT模型[7]。采用Westem blot检测EMT相关蛋白。

1.3数据处理

数据处理采用SPSS19.0统计软件，计數资料用%表示，采用X2分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，实验均重复3次，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1观察SMMC-7721细胞形态变化

显微镜观察对照组SMMC-7721细胞贴壁生长，细胞呈圆形，多边形;模型组SMMC-7721细胞由圆型逐渐变为长梭形，并集聚成团，发生纤维样改变;IGBR组SMMC-7721细胞数量减少及发生纤维样改变的细胞数量减少;IGBR可以抑制人肝癌SMMC-7721细胞EMT发生

2.3检测SMMC-7721细胞黏附能力

SMMC-7721细胞黏附率/（%）=[（试验组OD值/对照组OD值）-1]×100%。模型组为143%，IGBR组为87%。与模型组比较，IGBR组的粘附率明显降低（P<0.01），差异有统计学意义。

3 讨论

肝细胞具有高度的再生能力，对人体的稳态和组织修密切相关。有研究证实在肿瘤恶性病变时，TGF-β1是其启动子，TGF-β1可以诱导肝肿瘤细胞EMT，肿瘤细胞获得间充质表型，细胞的黏附能力增强。本实验研究发现10ng/mL的TGF-β1可诱导肝肿瘤SMMC-7721细胞EMT。TGF-β1诱导后使细胞数量增多，细胞形态发生纤维样改变，细胞黏附力增强。IGBR可以减少肝癌SMMC-7721细胞数量，降低细胞黏附能力，EMT标志蛋白Vimentin、Snail蛋白表达降低，E-cadherin表达上调，因此，IGBR可以抑制人肝癌SMMC-7721细胞EMT。

参考文献

[1] Dutta R，Mahato R I.Recent advances in hepatocellular carcinoma therapy[J].Pharmacol Ther，2017，173：106-117

[2] Giannelli G，Koudelkova P，Dituri F，et al.Role of epithelial to mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma[J].J Hepatol，2016，65（4）：798-808

[3] 张玉龙，张悦.草苁蓉生物学特性及人工辅助寄生技术研究[J].国土与自然资源研究，2015（03）：88-90