马 成，莫殿军，崔智慧△，刘金元，李亚波

(赤峰学院附属医院：1.中心实验室；2.检验科，内蒙古赤峰 024005；3.上海鼎晶生物医药科技股份有限公司，上海 201203)

人乳头瘤病毒(HPV)是一种无包膜的二十面体衣壳蛋白病毒，属于一种双链小DNA病毒，由病毒蛋白外壳L1和L2及遗传物质DNA组成[1]，具有明显的种属特异性，人是其唯一宿主，HPV主要感染人的皮肤和黏膜，致使人体呼吸道、生殖道和皮肤等出现不同程度的病变。宫颈癌的发病率呈现出增高和年轻化的趋势，许多研究证实，HPV感染与宫颈癌密不可分。目前，已发现200多种HPV亚型，依据其致病力强弱分为高危型和低危型，其中，高危型与多种恶性肿瘤的发生密不可分，如乳腺癌、结直肠癌等[2-3]，为宫颈癌和癌前病变的致病因素；低危型主要诱发外生殖器的尖锐湿疣和子宫颈上皮低级别的非典型增生(CINI)且不引起恶性病变。另外，HPV感染具有地域和年龄的差异，本文分析赤峰地区2 488例HPV检测结果并进行统计分析，为赤峰地区女性宫颈癌的预防、诊断和治疗提供临床参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年11月至2019年3月在妇科门诊就诊及进行健康体检的女性受试者2 488例为研究对象，排除病历资料不完整、月经期或严重疾病及标本细胞过少或不合格的患者，对其以年龄段为分组依据，分为≤30岁组，31～40岁组，41～50岁组，≥51岁组。

1.2仪器与试剂

1.2.1仪器 可调试混匀仪(大龙，MS-X)；低温高速离心机(eppendorf，Centrifuge 5424R)；恒温金属浴(上海沪析，HX-20)；实时荧光定量PCR仪(Thermo fisher，ABI 7500)；基因扩增仪(杭州晶格，K960)；数显恒温水浴锅(国华电器，HH-2)；分子杂交仪(兴化市分析仪器，FYY-3)；转移脱色摇床(海门其林贝尔，TS-8)。

1.2.2试剂 HPV基因分型(25种分型)检测试剂盒购自艾康生物技术(杭州)有限公司，可分型检测25种HPV亚型，包括14种高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73)；3种疑似高危型(HPV26、53、66)；8种低危型(HPV6、11、40、42、43、44、81、83)。

1.3PCR-反向点杂交法原理 试剂盒采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的基因检测技术，通过HPV特异引物，扩增出25种目的片段，与膜条上特异性探针杂交，依据杂交信号判断HPV基因型。

1.4方法

1.4.1标本的采集 医护人员采用扩阴器扩阴以暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口过多的分泌物，换取HPV专用采集拭子伸入宫颈，通过上皮交界处旋转3～4周以获得足够的宫颈脱落细胞，将其放入HPV专用的细胞保存液中，密封送检，4 ℃保存，1周内完成检测。

1.4.2HPV分型检测 标本的处理：标本充分震荡混匀后吸取1.0 mL于1.5 mL EP管中，12 000 r/min离心5 min，弃掉上清留沉淀；HPV阴性、阳性质控品和标本沉淀分别加入混匀的50 μL核酸提取液，混匀后100 ℃干浴10 min，12 000 r/min离心10 min，上清供PCR扩增备用。试剂配制与上样：依据检测标本数量配置PCR反应液，分别取标本、阴性和阳性质控品上清液5 μL于PCR反应液中，按照说明书中PCR反应条件进行扩增。杂交、洗膜、显色和结果判读均严格按照说明书进行。

1.5统计学处理 采用SPSS21.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV感染率及各亚型分布情况 送检2 488例标本中共检出HPV阳性标本730例，总感染率为29.34%(730/2 488)，共检出24种亚型(高危亚型17种，低危亚型7种)，其中低危亚型HPV83没有检出，高危亚型占前3位的分别为HPV52(132例)、HPV16(129例)和HPV58(107例)，低危亚型占前3位的分别为HPV42(66例)、HPV81(44例)和HPV43(41例)，各亚型分布情况见表1。

表1 HPV各亚型感染分布情况

2.2HPV单一亚型感染与多重亚型感染情况 730例阳性标本中，单一亚型占479例，阳性构成比为65.62%；多重亚型占251例，阳性构成比为34.38%，因此，HPV主要以单一亚型感染为主，见表2。

表2 单一亚型感染和多重亚型感染分布情况

2.3阳性标本中高危亚型、低危亚型和混合亚型感染情况 730例阳性标本中，高危亚型519例，阳性构成比为71.10%；低危亚型105例，阳性构成比为14.38%；混合亚型106例，阳性构成比为14.52%，因此，HPV主要以高危亚型感染为主，见表3。

表3 高危、低危和混合亚型分布情况

2.4不同年龄组中HPV感染阳性率比较 730例阳性标本在4个年龄组阳性例数分布情况为102、258、239和131例；阳性构成比为13.97%、35.34%、32.74%和17.95%；检出率分别为29.74%、27.92%、28.25%和34.93%。因此,各年龄段阳性构成比存在明显差异,且最高年龄段在31～40岁；检出率在各年龄组间差异不明显(χ2=7.065，P=0.07)，见表4。

表4 各年龄段HPV感染亚型分布情况

3 讨 论

宫颈癌是临床最常见的妇科恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌，严重威胁女性生命与健康，其早期临床症状不典型，一旦出现明显症状与体征时，临床提示肿瘤恶性程度较高，死亡风险较大[4]。但是，宫颈癌的发生与发展分为3个连续性的阶段，即宫颈上皮内瘤变、原位癌和浸润癌，经历至少10年甚至更长时间。因此，对宫颈癌的早期筛查、预防、诊断与治疗尤为重要[5]。1996年，世界卫生组织认为HPV-DNA是引发宫颈癌的关键致病因子，HPV-DNA的基因分型检测可以作为宫颈癌早期筛查的依据。

HPV感染分布具有地理区域性和年龄差异，不同国家和地区的宫颈癌发生与HPV不同型别感染具有相关性，且宫颈癌的检出率呈现年轻化的趋势。

本文对赤峰地区2 488例标本进行HPV基因分型检测，感染率为29.34%，单一亚型阳性构成比为65.62%，高危亚型感染以HPV52、16、58、53、51为主，与洪萍等[6]2019年3月报道的HPV感染谱分布特点基本一致，说明相近时间段北方地区HPV感染谱具有趋同性。

对比本院检验科李树敏等[7]2016年的报道，报道显示，赤峰地区HPV阳性率(23.21%)、单一亚型阳性构成比(37.14%)和高危亚型感染优势型别(HPV16、18、31、33、52)与本研究结果存在差异，原因可能与时间、季节、受检人群和标本量有关。在我国HPV感染和宫颈癌发病率每年呈上升趋势；且有报道称各季节高危亚型HPV感染略有差异，HPV16、58、52四季中常见，HPV31春季常见，HPV18夏季常见，HPV33秋季常见[8]。本文选取标本时间主要集中在冬季，因此，HPV18、31、33高危亚型相对较少；且李树敏等[7]入组人群为妇科就诊患者，不包括体检人群，大多存在妇科炎症问题和不同程度的宫颈病变，与宫颈腺癌相关的HPV18所占比例升高[9-11]，HPV多重亚型感染与宫颈上皮内病变呈正相关[12]，所以李树敏等[7]报道以多重亚型感染为主。既往研究证实，女性宫颈疾病的严重程度与HPV感染亚型、多重感染亚型和感染持续时间成正相关。

本研究结果显示，HPV阳性率(29.34%)高于内蒙古自治区中西部的23.3%[13]，低于邯郸地区的36.26%[14]；感染优势型别(HPV52、16、58、53、42)与任妹等[15]报道我国常见HPV感染型别(HPV16、18、52、58、33)存在差异，以上数据显示，HPV感染分布存在时间、季节、人群和地理区域性差异。

本研究将女性受试者按年龄分为4组，阳性构成比占比较高的为31～40岁和41～50岁年龄组，且31～40岁最高。因此，加强本年龄组的筛查有利于宫颈癌的防治；各年龄组间检出率差异无统计学有意义(P=0.07)，因为研究对象以来院就诊患者居多，存在不同程度症状，检出率在各年龄组间趋于一致。

本地区HPV高危亚型、低危亚型和混合亚型阳性构成比分别为71.10%、14.38%和14.52%，高危亚型中前3位为HPV52、16和58，与邯郸地区HPV感染高危亚型前3位存在差异[14]，而HPV16、58和52亚型在亚洲人群中，尤其是中国高发地区具有重要指导意义。

综上所述，随着宫颈癌项目筛查的进行，HPV疫苗的普及，公众健康意识的提高，就医人群结构和目的发生变化，区域性HPV感染谱呈现动态过程。本研究进一步更新和补充了区域性数据库，为本地区HPV最新流行情况、宫颈癌的筛查、预防和治疗提供理论依据，具有重要的指导意义。