彭军波，李兴红，张玮，周莹，黄金宝，燕继晔

葡萄溃疡病菌外泌蛋白LtGH61A的致病力及基因表达模式

彭军波，李兴红，张玮，周莹，黄金宝，燕继晔

（北京市农林科学院植物保护环境保护研究所/北方果树病虫害绿色防控北京市重点实验室，北京 100097）

【目的】由葡萄座腔菌属（）真菌引起的溃疡病是葡萄生产上的重要病害之一，在国内多个葡萄产区发生，严重威胁葡萄的产量及品质。本研究对葡萄溃疡病菌（）中一个假定外泌蛋白LtGH61A进行功能分析，为进一步解析葡萄溃疡病菌的致病机理及病害防控提供理论依据。【方法】通过SignalP 4.0预测LtGH61A蛋白的信号肽；氨基酸序列同源比对结合基因功能注释，预测LtGH61A蛋白的功能；通过酵母互补试验分析LtGH61A蛋白的外泌特性；采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析在病原菌营养菌丝及侵染寄主不同阶段的表达量；借助RNA干涉（RNAi）对进行表达抑制；通过葡萄枝干离体接种试验，分析LtGH61A蛋白对葡萄溃疡病菌致病力的影响。通过比较菌落直径，分析LtGH61A蛋白对葡萄溃疡病菌菌丝生长速率的影响。【结果】信号肽预测表明LtGH61A蛋白N端具有一个长度为18个氨基酸的信号肽；基因功能注释推定的编码产物属于糖苷水解酶61（GH61）家族，能酶解纤维素类物质；互补蔗糖酶外泌缺陷型酵母YTK12结果表明，LtGH61A蛋白的信号肽具有外泌活性，能够引导酵母YTK12蔗糖酶的外泌；与营养菌丝阶段相比，的表达量在病原菌侵染阶段显著升高，并且在接种后48 h高达营养菌丝阶段的19倍；通过RNAi试验及qRT-PCR验证，获得了2个表达量明显降低的阳性转化子，分别命名为RNAi-LtGH61A1和RNAi-LtGH61A2；……