王娟芳,戴建君,姜敏,任建鸾,李德志,张鹏,孙建和,汤芳*

(1.南京农业大学动物医学院/农业农村部细菌学重点实验室,江苏 南京 210095; 2.上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240)

禽致病性大肠杆菌(avian pathogenicEscherichiacoli,APEC)是肠外致病性大肠杆菌(extraintestinal pathogenicEscherichiacoli,ExPEC)中的一种,可以引起鸡、火鸡及其他禽类的肠道外疾病,通常伴有全身性感染和特征性纤维性病变,如心包炎、肝周炎、气囊炎等,甚至引起败血症而急性死亡[1-3]。由APEC引起的细菌感染是造成全球家禽养殖重大经济损失的重要原因[4-6]。

有试验证明APEC在大鼠上可引起与新生儿脑膜炎大肠杆菌(neonatal meningitisEscherichiacoli,NMEC)感染类似的脑膜炎症状,提示APEC具有人畜共患的风险[7]。越来越多的证据显示APEC对人类健康造成了潜在威胁[3,8-12]。因此,加强长期监测禽大肠杆菌病对养禽业和公共卫生都具有重要意义。

APEC的血清型众多,目前报道的致病力较强的血清型主要有O1、O2和O78,临床上发病率较高的禽大肠杆菌病也主要以这3种血清型为主[6,13]。目前对APEC O1、O2和O78血清型菌株的检测报道较少,且所用检测方法耗时长,仪器设备较繁琐,灵敏度低。因此本试验针对APEC的这3种血清型各设计1对特异性引物,通过优化3种引物的比例、退火温度以及其他PCR反应条件,以建立能够同时扩增APEC 3种主要血清型的三重PCR检测方法,实现对APEC O1、O2和O78血清型的快速检测。

1 材料与方法

1.1 菌株

O1血清型大肠杆菌CVCC249、O2血清型大肠杆菌CVCC251、O78血清型大肠杆菌CVCC1553均购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心。金黄色葡萄球菌98064、金黄色葡萄球菌ATCC25923、肠炎沙门氏菌1806、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028和枯草芽胞杆菌0802由本实验室保存。……