方志军

摘要：目的  觀察应用实时荧光PCR检验法检测乙肝病毒DNA的效果，为临床提高诊断乙型肝炎病毒的准确性提供思路。方法  选取2015年11月～2018年7月于本院就诊的458例乙型肝炎患者作为研究对象，所有患者均经标准的abbot药盒检测确诊，其中大三阳患者241例，小三阳患者217例。患者入院后均采集空腹静脉血，制样本后采用酶联免疫吸附检验法和实时荧光PCR检验，比较两种检验方法对患者乙肝类型的阳性检出率。结果  实时荧光PCR检验法对大三阳的阳性检出率为95.43%，小三阳的阳性检出率为69.58%，均高于酶联免疫吸附检验法的85.06%、55.76%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论  实时荧光PCR检验法可直观的反映乙型肝炎病情状况，具有较高的诊断效果，临床医师可在实际工作中根据患者经济、病情等综合因素进行选用。

关键词：实时荧光PCR检验;乙肝病毒DNA;酶联免疫吸附检验法;乙型肝炎

中图分类号：R446.5                                 文献标识码：A                                 DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.22.062

文章编号：1006-1959（2019）22-0175-03

Evaluation of the Effect of Real-time Fluorescent PCR on Detection of Hepatitis B Virus DNA

FANG Zhi-jun

（1.Department of Clinical Laboratory，the Fourth Hospital of Huangshi，Huangshi 435006，Hubei，China;

2.Yiyang Medical Laboratory Of Huangshi，Huangshi 435006，Hubei，China）

Abstract：Objective  To observe the effect of real-time fluorescent PCR assay for detecting hepatitis B virus DNA， and to provide ideas for clinical improvement of hepatitis B virus accuracy. Methods  A total of 458 patients with hepatitis B who were admitted to our hospital from November 2015 to July 2018 were enrolled in the study. All patients were diagnosed by standard abbot kit. Among them， 241 patients with Dasanyang patients and 217 patients with Xiaosanyang patients. example. Fasting venous blood was collected from all patients after admission. After the samples were prepared， enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and real-time fluorescent PCR were used to compare the positive detection rates of the two test methods for patients with hepatitis B type. Results  The positive detection rate of Dasanyang by real-time fluorescent PCR assay was 95.43%， and the positive detection rate of Xiaosanyang was 69.58%. Both were higher than 85.06% and 55.76% of the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA），the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion  Real-time fluorescent PCR assay can directly reflect the status of hepatitis B， and has a high diagnostic effect. Clinicians can choose according to the comprehensive factors such as patient's economy and condition in actual work.

Key words：Real-time fluorescent PCR test;Hepatitis B virus DNA;Enzyme-linked immunosorbent assay;Hepatitis B

近年来，随着乙型肝炎（viral hepatitis type B）患者比例在世界各地的不断增长，使得乙肝疾病的诊疗受到越来越多的关注和重视。乙肝作为临床常见的一类慢性肝炎，具有较高的感染率和转化率，患者感染乙肝病毒后，随着肝脏炎性反应过程的进行可能发展为肝硬化或肝癌，对患者生命安全造成严重威胁，故需要在临床中采用具有较高检出率的方法对患者予以诊断。但由于乙型肝炎类型较为复杂，临床上无法对各类抗原实现有效检验，存在一定的漏诊概率，影响患者后期诊疗进度和效果[1，2]。因此，本研究通过比较应用实时荧光PCR检验法及酶联免疫吸附检验法诊断乙型肝炎的效果，旨在为临床提高诊断乙型肝炎的准确性提供思路，特选取本院458例乙肝患者展开研究，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选取2015年11月～2018年7月于湖北省黄石市第四医院接受诊疗的乙肝患者458例作为研究对象，经过标准abbot药盒检測确诊大三阳患者241例，小三阳患者217例。大三阳患者中男135例，女106例，年龄19～45岁，平均年龄（32.08±4.21）岁，病程2～13年，平均病程（7.42±2.58）年，经免疫学检验后乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝核心抗体（抗HBC）三项检验结果均为阳性;小三阳患者中，男126例，女91例，年龄20～41岁，平均年龄（30.46±4.12）岁，病程1～11年，平均病程（6.15±2.34）年。大三阳与小三阳患者年龄、性别及病程比较，差异无统计学意义（P>0.05），两类检验法最终检验结果可对比。

1.2检验设备及仪器  实时荧光PCR检验采用赛默飞世尔科技（中国）有限公司生产的实时荧光定量 PCR 检验仪，及配套检验试剂。酶联免疫吸附检验法采用上海酶联生物科技有限公司生产的人乙肝两对半（HBV Casset）ELISA试剂盒。

1.3检验方法  所有患者在入院第2天取清晨空腹状态肘静脉血3～5 ml，离心机3000 r/min分离血清，血清样本完成后储存于设备箱中，备用。其后按照乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）、乙肝核心抗体（HBcAb）的顺序对所有患者血清样本进行酶联免疫吸附与实时荧光PCR检验。检验操作需严格按照仪器及试剂盒说明进行，避免检验结果偏差[3]。

1.4观察指标  比较两种检验方法对患者乙肝类型的阳性检出率。大三阳诊断指标：HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（+）、HBeAb（-）、HBcAb（+） ，表明患者处于乙肝急性或慢性期且病毒复制活跃，具有较高传染性。小三阳诊断指标：HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（-）、HBeAb（+）、HBcAb（+） ，表明患者处于急性乙肝病毒感染恢复期，且携带有慢性乙肝表面抗原。

1.5统计学方法  本研究数据经SPSS 25.0统计学软件统计处理，计数资料用（n，%）表示，比较行？字2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

实时荧光PCR检验法对大三阳、小三阳患者的阳性检出率均高于酶联免疫吸附检验法，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。

3讨论

乙型肝炎作为一种具有较高传染率的肝脏疾病，传播途径多种多样，其中血液与母婴传播的感染率较高。患者感染后，若无法及时诊断和治疗，则极易在急性期转化为慢性乙肝，加重患者病情。目前临床中对于乙肝的诊断主要采用酶联免疫吸附检验法，通过试剂盒对患者血清进行免疫反应检测，但仅可评估患者病情进展，无法实现对实际病毒载量和传染性的检验，且易由于操作不当影响检验结果[4，5]。

本研究结果显示，实时荧光PCR检验法对大三阳患者的阳性检出率为95.43%，小三阳患者的阳性检出率为69.58%，均高于酶联免疫吸附检验法的85.06%、55.76%，差异具有统计学意义（P<0.05）。分析原因，实时荧光PCR检验法对血清中各类乙肝抗原、抗体进行染色，利用荧光染料在检验中表现出的特殊波长，便于荧光探针对反应信号的收集，从而实现对患者乙肝抗原、抗体载量的实时检测。除此之外，实时荧光PCR检验法对于部分乙肝前期且未在酶联免疫吸附检验中检出乙肝表面抗原的患者，具有较高的诊断特异性，提高诊断准确性。实时荧光PCR检验对患者体内乙肝病毒的变异性具有较好的检测效果，能够对病毒的感染性进行有效评估，降低感染、传染风险，且相较于传统ELISA检测法，实时荧光PCR检测可对乙肝病毒复制情况及数量进行准确反映。但是，该方法仍存在一定的缺陷，因为即使在HBeAg指标转阴及患者肝功基本复常的情况下，患者体内仍存在少量HBV-DNA，且HBV表达在实际检验操作中受人体免疫等因素影响较为明显，导致在实际应用中，虽然实时荧光PCR检验法可对乙肝各类型及乙肝病毒载量进行准确反映，但无法对恢复期患者的乙肝病毒活跃性进行检测或受到患者自身健康状况影响检验结果缺乏可参考性，且检测费用相对较高，故需要在实际应用中根据患者实际选取检验方法。

乙肝治疗的根本目的在于长期持续抑制病毒的复制，阻止疾病进展。在多个国家和地区的慢性乙肝防治指南中，均将实时荧光PCR检验法检测不到HBV-DNA作为停药的重要指征。定量检测血清中的HBV-DNA是乙肝抗病毒治疗过程中疗效评估和治疗终点判定的关键因素，乙肝病毒DNA检测对用药的剂量、用药时间、是否需要联合用药以及用药效果等提供了重要参考依据。同时，乙肝病毒DNA检测还可以反映病毒复制的活跃程度，间接反映机体的免疫应答水平，对乙肝的治疗起到辅助作用，可以增强患者的治疗信心。

综上所述，在临床诊断中采用实时荧光PCR检验法，可对患者乙肝病情相较为直观的反映，且对患者病情具有较好的诊断效果，可在实际诊疗中根据患者经济、病情等综合因素进行选用。

参考文献：

[1]陈艳.实时荧光PCR检验用于乙肝病毒DNA检测的临床价值[J].临床研究，2018，26（10）：146-148.

[2]姚兆基.实时荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物的价值[J].内蒙古医学杂志，2017，49（4）：485-486.

[3]杜锴.实时荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA的价值分析与研究[J].中国现代药物应用，2017，11（1）：55-57.

[4]汪圣强，耿合员，殷鹏飞，等.实时荧光PCR在乙肝病毒DNA检测中的临床意义[J].中国医学工程，2015，23（3）：29-30.

[5]杜清标.实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义探析[J].医学信息，2015，28（45）：73-74.

收稿日期：2019-6-5;修回日期：2019-6-19

编辑/钱洪飞