刘海涛 罗 庆 范 立 杨 甜

1.南昌大学第一附属医院耳鼻喉头颈外科，江西南昌 330006；2.江西卫生职业学院五官教研室，江西南昌 330052

变应性鼻炎（AR）是一种以变应原激发、IgE 介导、T 辅助细胞（Th）2 反应为主的慢性鼻部疾病［1］。主要分类是Th1、Th2 细胞和调节性T 细胞（Treg）［2］。Th1细胞分泌γ 干扰素（IFN-γ）和白细胞介素（IL）-2 等细胞因子，Th2 细胞分泌IL-4、IL-5、IL-10 和IL-13。在这些细胞因子中，Treg 细胞调节Th1/Th2 平衡起关键作用［3-4］。细胞因子信号转导负调控蛋白（SOCS）2 是SOCS 家族中的重要成员［5-6］。Knosp 等［7］研究证明，SOCS2 基因敲除小鼠对Th2 介导的气道炎症的易感性增加。本研究初步观察SOCS2 在AR 组织中的表达情况及与炎性因子的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源与分组

AR 组选取南昌大学第一附属医院2018 年2～7 月行鼻中隔偏曲或翼管神经切断术的AR 患者20 例，男11 例，女9 例，年龄20～69 岁。对照组鼻中隔偏曲且无其他鼻科疾病的患者15 例，男8 例，女7 例，年龄18～65 岁。取下鼻甲前端鼻黏膜剪成两份，一份置于4%多聚甲醛固定；另一份放入含有Trizol 的离心管内，转移到冰箱中保存。

1.2 试剂与材料

SOCS2 兔抗人多克隆抗体（bs-1896R）购于北京博奥森有限公司。Trizol 购于Invitrogen 公司。通用型试剂盒（小鼠/兔聚合物法检测系统pv-6000）、正常山羊血清（ZLI-9022）、二氨基联苯胺（DAB）试剂盒（ZLI-9017）购于北京中衫金桥有限公司。

1.3 免疫组化法检测SOCS2 表达

标本置于4%多聚甲醛中固定24 h、常规石蜡包埋，脱蜡，修复抗原，去除内源性过氧化物酶，用正常山羊血清封闭，滴加一抗SOCS2（1∶300），4℃过夜，PBS 冲洗3 次，加辣根酶标记抗山羊IgG 室温孵育1 h，显色剂显色，树胶封片。阴性组以封闭液替代一抗。将图像输入Image-pro Plus 6.0 专业图像分析软件，计算平均吸光度值。

1.4 SOCS2 mRNA 及T 细胞因子mRNA 表达

引物合成：在GenBank 查找人类SOCS2、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、FOXP3 序列，引物设计和检测采用Primer 5.0 软件。引物由华大基因有限公司合成。引物序列如下，SOCS2：5'-ACGCGAACCCTTCTCTGACC-3'，5'-CATTCCCGGAGGGCTCAAGG-3'；IFN-γ：5'-AGTGATGGCTGAACTGTCGC-3'，5'-CTGGGATGCTCTTCGACCTC-3'；IL-4：5'-GTGCACCGAGTTGACCGTAA-3'，5'-GCGAGTGTCCTTCTCATGGT-3'；IL-5：5'-GGATGCTTCTGCATTTGAGTTT-3'，5'-CAGTGCCAAGGTCTCTTTCA-3'；IL-13：5'-CTGCAATGGCAGCATGGTAT-3'，5'-TCAGCATCCTCTGGGTCTTC-3'；FOXP3：5'-GAAACAGCACATTCCCAGAGTTC-3'，5'-ATGGCCCAGCGGATGAG-3'；GAPDH：5'-AAATCAAGTGGGGCGATGCT -3'，5'-CAAATGAGCCCCA -GCCTTCT-3'。用Trizol 试剂从鼻组织中提取总RNA。用寡聚体（dT）18 引物和M-MLV 逆转录酶（TaKaRa Bio Inc）从2 μg 总RNA 中合成cDNA。用ABI PRISM 7600检测系统（美国加州福斯特市生物系统）和SYBR 预混Taq（TaKaRa Bio Inc）进行实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）。计算样本复制物的循环阈值（Ct）。计算靶基因mRNA水平的倍数变化为2-ΔΔCt。qPCR 仪（StepOneTMReal-Time PCR System）进行mRNA 定量检测，反应条件如下：95℃变性30 s；95℃，15 s；60℃，1 min 退火、延伸，共40 个循环。

1.5 AR 患者视觉模拟评分（VAS）

评价六大症状（喷嚏、流涕、鼻痒、鼻塞、眼痒和流泪）。方法：患者在标尺上标出各种症状相应分值，“0”代表无此种症状，“10”代表此种症状最重，统计VAS总分［8-9］。

1.6 统计学方法

采用SPSS 22.0 和GraphPad Prism 6 进行统计学分析。符合正态分布的计量资料用均数±标准差（）表示，采用t 检验，不符合正态分布的计量资料用中位数（四分位数间距）［M（Q）］表示，采用Mann-Whitney U 检验；计数资料采用χ2检验；确定变量线性关系采用Pearson 相关检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AR 组与对照组的SOCS2 免疫组化表达及平均吸光度值比较

SOCS2 在AR 组和对照组中均有免疫组化表达。AR 组SOCS2 平均吸光度值显著低于对照组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见图1（封四）。

2.2 AR 组与对照组SOCS2 和细胞因子的相对表达量比较

qRT-PCR 显示，AR 组的SOCS2、IFN-γ 和FOXP3相对表达量显著低于对照组，IL-5、IL-13、IL-4 相对表达量显著高于对照组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见图2。

2.3 AR 患者SOCS2 与细胞因子和VAS 总分的相关性

AR 患者SOCS2 相对表达与IL-4、IL-5、IL-13、VAS 总分相对表达呈负相关（r=-0.66、-0.50、-0.51、-0.65，P ＜0.05），与FOXP3 相对表达呈正相关（r=0.67，P ＜0.05），与IFN-γ 相对表达无相关性（r=0.39，P ＞0.05）。见图3。

图2 AR 组与对照组SOCS2 和细胞因子的相对表达量比较

图3 AR 患者SOCS2 与细胞因子和VAS 总分的相关性

3 讨论

AR 的发病机制为环境中刺激因子作用于具有遗传背景的个体，引起T、B 淋巴细胞免疫功能紊乱，主要表现为Th2 的优势活化［10-13］。研究证实［14］，SOCS2 参与Th 细胞平衡调节，抑制Th2 细胞分化和发育，对Treg 稳定有重要作用［15-16］。

本研究显示，AR 组SOCS2 免疫组化表达和平均吸光度值均较对照组降低。SOCS2 优先在天然调节性T 细胞和诱导的Treg 中表达［9，17］。SOCS2 对维持iTreg的抗炎功能是必需的，可将SOCS2 作为Th2 型偏移疾病的一个潜在的治疗靶点［18］。

本研究结果显示，AR 组的SOCS2、IFN-γ 和FOXP3相对表达量显著低于对照组，IL-5、IL-13、IL-4 相对表达量显著高于对照组，与国内外相关研究结果相符［18-19］。临床中常用VAS 来评估AR 症状的严重程度［20］。本研究发现，SOCS2 可作为临床上评估AR 病情的一个参考指标。

综上所述，SOCS2 在AR 组织中表达降低与多种因子相关，在AR 的发病机制中起重要作用。后期还将进一步研究细胞因子在AR 中的免疫功能和发病机制。