摘要：了解农药残留快速检测酶试剂盒对不同农药的灵敏度。通过4种市售酶试剂盒对克百威等5种农药分别进行5个浓度的测定，来比较试剂盒的优劣。4种酶试剂盒不是对所有的有机磷农药和氨基甲酸酯类农药都敏感;4种试剂盒优劣为：试剂盒A>试剂盒C>试剂盒B>试剂盒D。在日常检测中需要对所购买的快检产品进行一定的实验验证，选取适合的产品。在条件允许的情况下对于抑制率超过50%的样品不仅需要复测，还需要采用色谱、质谱定性、定量等方法进行检测。

关键词：酶试剂盒;有机磷;氨基甲酸酯类农药;灵敏度

中图分类号：S-3

文献标识码：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191215006

引言

在食品安全问题越来越受到关注的今天，水果蔬菜中的农药残留超标问题日益突出，严重危害人体健康，因此准确又快速筛查出果蔬中的农药残留是否超标具有重大意义[1，2]。当前农药残留检测的主要方法为酶抑制率法和色谱法等[3]。酶抑制率法由于成本低、操作简便、时间短等优点被广泛应用于流通市场及蔬菜基地的快速筛查中，在果蔬的农药残留的监管中，成为一种重要的监管手段[4-6]。市面上出现了多种农药残留快速检测酶试剂盒，质量参差不齐，且在进行农药残留检测时，仅能检测大部分有机磷和氨基甲酸脂类农药，而且对不同的农药品种灵敏度是不一样的[7]。作为农药残留酶试剂的生产厂家，为了更好地改进、研发酶试剂以及为使用者在选购产品时提供一定的参考借鉴，采购了2种市售其他家的酶试剂和自身生产的2种不同状态的酶对5种农药的灵敏度进行了测试，以KJ201710国家食药监总局2017年第113号公告附件中的方法为依据来进行评价。

1材料与方法

1.1实验仪器

GNSPRD-16型16通道农残速测仪（厦门绿安分析仪器有限公司）;HH-2型恒温水浴锅（金坛区白塔金昌实验仪器厂）;JJ-200电子天平（河南双杰计量仪器有限公司）;5mL移液枪（宁波托普森科学仪器有限公司）;100μL移液枪（美国Thermo公司）。

1.2试剂

酶试剂盒A（郑州华洲，显色剂、底物、缓冲剂为粉末状，酶为液态）;酶试剂盒B（郑州华洲，酶、显色剂、底物、缓冲剂均为粉末状）;酶试剂盒C（外采品牌，显色剂、底物、缓冲剂为粉末状，酶为液态）;酶试剂盒D（外采品牌，显色剂、底物、缓冲剂为粉末状，酶为液态）。在实验前按照说明书要求将试剂盒里的缓冲剂、酶试剂（粉末状需要配制，液态状直接使用）、显色剂、底物进行配制：缓冲剂用500mL的蒸馏水溶解配制，粉末状酶试剂和显色剂分别用10mL的缓冲液溶解混匀，底物用10mL的纯净水进行溶解配制。

克百威、敌百虫、丙溴磷、敌敌畏、灭多威5种农药标准品（1000μg/mL，农业环境保护科研检测所），使用时按照需要梯度稀释成1μg/mL标准中间液。

1.3实验设计

本实验参照KJ201710蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测中第1种方法酶抑制率法，根據方法中给出的检测限：敌百虫0.1mg/kg，丙溴磷0.5mg/kg，灭多威0.2mg/kg，克百威0.02mg/kg，敌敌畏0.2mg/kg为依据，不同的农药按照检出限不同设置5个浓度梯度，每1个浓度梯度设置3次重复。

1.4对照液的测试

分别移取3mL缓冲溶液于10mL 带盖的玻璃瓶中，再加入0.1mL的酶液、0.1mL的显色剂，摇匀后于37℃水浴锅中放置15min，再加入0.1mL底物摇匀，立即放入仪器的比色池中，用农残仪测定3min内的吸光度变化值即为ΔA0。

1.5样品处理方法

向1.3中制备的5个浓度的农药中分别加入10mL缓冲液，混匀后备用。分别移取3mL的样品提取液于10mL 带盖的玻璃瓶中，依次往提取液中加入0.1mL的酶液、0.1mL的显色剂，摇匀后于37℃水浴锅中放置15min，再加入0.1mL底物摇匀，立即放入仪器的比色池中，用农残仪测定3min内的吸光度变化值，通过仪器读出其抑制率。

1.6实验数据的处理

根据每一个处理的3次测定值计算出平均值，根据平均值列出抑制率、农药浓度的数据表（见表1），根据数据比较4种不同酶试剂盒对5种农药的灵敏度。

4种酶试剂盒在KJ201710中5种农药检出限浓度的抑制率与农药浓度的对应关系（见表2），根据数据可以看出更接近或优于标准方法的酶试剂盒。

2结果分析

从表1中可以看出，对于克百威来说，试剂盒A和试剂盒C均在推荐的检出限浓度可以测出阳性，试剂盒A在克百威浓度为0.005mg/L时抑制率即为60.8%，而试剂盒C在克百威浓度为0.02mg/L时抑制率为59.1%，试剂盒B在克百威浓度为0.04mg/L时抑制率为57.1%。说明对于克百威来说，试剂盒C是最佳的选择。

对敌百虫来说，浓度为0.01mg/L时，试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D的抑制率分别为77.8%、80.1%、70.6%，试剂盒A在敌百虫浓度为0.03mg/L抑制率为59.9%，而此时另外3种试剂盒抑制率均超过90%，说明这4种试剂盒对敌百虫都比较敏感，尤其是试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D，同时也反应出对于试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D应该稀释更低的浓度去进行实验。

对丙溴磷来说，浓度为0.05mg/L时，试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D的抑制率分别为60.8%、60.0%、66.2%，而试剂盒A在丙溴磷浓度为0.5mg/L时抑制率为69.2%，说明对于丙溴磷来说，试剂盒A是最佳选择，其他3种试剂盒普遍存在对丙溴磷较敏感。

对敌敌畏来说，浓度为0.03mg/L时，试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D的抑制率均超过90%，试剂盒A在敌敌畏浓度为0.06mg/L时抑制率为53.9%，在敌敌畏浓度为0.2mg/L时抑制率为72.7%，其它3种试剂盒的抑制率均达到100%，说明4种试剂盒均对敌敌畏比较敏感，而试剂盒A在敌敌畏浓度增加过程种，抑制率增幅不大，比较稳定。

对灭多威来说，4种试剂盒的抑制率趋势不一样，试剂盒D在实验的5个浓度中始终没有达到50%以上，试剂盒C在灭多威浓度为0.2mg/L，抑制率达到50%以上，而试剂盒A、B在浓度为0.1mg/L时，抑制率即达到50%以上，但是在浓度为0.2mg/L抑制率增加的并不多。

表2主要是对表1进行简化，能够更直观的反应出4种试剂盒的优劣，在方法推荐的检出限下，试剂盒A整体要优于另外3种试剂盒，尤其是对敌百虫、丙溴磷、敌敌畏来说。

3结论

在方法推荐的检出限下，4种试剂盒优劣为：试剂盒A>试剂盒C>试剂盒B>试剂盒D，从表1和表2中也可得知，如果蔬菜中残留了一定量的敌百虫、丙溴磷、敌敌畏，因为试剂盒B、C、D均对低浓度的这3种农药敏感，就很容易导致假阳性的出现;而如果蔬菜中残留了一定量的克百威、灭多威，因为試剂盒D对这2种农药不灵敏反而容易导致假阴性的出现。根据国标和行业标准的规定[8]，样品的抑制率达到50%则判定样品农药残留超标，因为国家限量标准对每一种农药的限量不同，每种试剂盒对每一种农药的敏感度也不一样，因此在日常检测中需要对所购买的快检产品进行一定的实验验证，选取适合的产品。在条件允许的情况下对于抑制率超过50%的样品不仅需要复测，还需要采用色谱、质谱定性、定量等方法进行检测。

参考文献

[1] 蒋雪松，王维琴，许林云，等.农产品/食品中农药残留快速检测方法研究进展[J].农业工程学报，2016（20）：267-274.

[2]胡明燕，车明秀，张艳，等.快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留方法的优化[J].湖北农业科学，2018，57（21）：112-114.

[3]陈冬兰，夏彤，王志波，等.几种常用蔬菜农药残留检测技术概述及比较[J].现代农业科技，2010（9）：172-175.

[4]王洁莲.酶抑制率法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留[J].山西农业科学，2011，39（2）：156-158.

[5]张宝华，魏巍.酶抑制率法检测蔬菜农药残留的效果研究[J].南方农业，2018，12（9）：105-106.

[6]刘顺宇，郭淑贞，林双娣，等.酶抑制法在农药残留快速检测中的应用分析[J].湖南农业科学，2017（7）：85-87，91.

[7]罗俊霞，李德瑜，袁小伟，等.酶抑制法测定多种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的试验[J].浙江农业科学，2015，56（6）：883-887.

[8]GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测[S].

作者简介：

张欣（1987-），女，硕士，检测部经理。研究方向：食用农产品快速检测。