陈静，耿红卫，李重实，李文杰，白鹏

（辽宁省农业发展服务中心，辽宁大连116015）

对虾养殖业是辽宁省水产养殖业的重要组成部分，主要以中国对虾、凡纳滨对虾（即南美白对虾）养殖为主。近几年，随着海参养殖产业持续下滑，对虾养殖呈上升趋势。辽宁省虾年产量由2014年的31572吨攀升到2018年的50000余吨；虾类育苗数量也从2014年近140亿尾上升到2018年180余亿尾。影响对虾养殖产量的主要因素之一是病害，为掌握对虾病害情况，提高预警能力，为其防控提供参考。辽宁省水产苗种管理局自2014年起对中国对虾和凡纳滨对虾苗种进行两种病毒（WSSV、TSV）的监测，近五年监测情况如下。

1 .材料和方法

1.1 采样

2014年～2018年每年5月中旬～6月中旬，分别从大连市、丹东市、营口市、锦州市、盘锦市、葫芦岛市等对虾主要养殖区苗种生产场，采集中国对虾仔虾和凡纳滨对虾仔虾样品。具体采样方法依据《水生动物产地检疫采样技术规范》（SC/T 7103-2008）的相关规定执行[1]。

1.2 方法

1.2.1 WSSV检测

按照天根生化科技有限公司海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒操作步骤，提取各待测样品中的基因组总DNA，于-20℃下保存备用。按照《白斑综合征（WSD）诊断规程 第2部分 套式PCR检测法》（GB/T 28630.2-2012）检测方法进行样品WSSV检测[2]。

1.2.2 TSV检测

按照天根生化科技有限公司动物组织总RNA提取试剂盒操作步骤，提取各待测样品中的基因组总RNA，于-20℃下保存备用。按照《对虾桃拉综合征检疫技术规范》（SN/T 1151.1-2011）[3]检测方法进行样品TSV检测。

2 结果分析

2.1 中国对虾仔虾中WSSV的检测结果

2014年～2018年对中国对虾仔虾样品中WSSV的检测结果（见表1）显示，WSSV年度总检出阳性率呈现先下降后上升的现象。部分对虾样品WSSV的PCR检测结果如图1所示，第1次PCR产物经电泳后，阳性对照样品及阳性检出样品在1447bp处出现1条特异性条带，在第2次PCR结果显示在941bp处有明显条带，而空白对照样品和阴性对照样品则在1447bp或941bp处均无条带。

表1 中国对虾仔虾中WSSV的检测结果

图1 部分中国对虾仔虾样品WSSV PCR电泳谱图

2.2 凡纳滨对虾仔虾中WSSV检测结果

2014年～2018年对凡纳滨对虾仔虾中WSSV检测结果（见表2）显示，年度阳性率呈现先下降后上升的趋势。部分对虾样品PCR检测结果如图2所示。

表2 凡纳滨对虾仔虾中WSSV的检测结果

图2 部分凡纳滨对虾仔虾样品WSSV PCR电泳谱图

2.3 中国对虾仔虾中TSV的检测结果

2014年～2018年对中国对虾仔虾中TSV的检测结果（见表3）显示，2014年和2018年有检出，阳性率分别为2.0%和1.9%，其余年份均没有检出。部分对虾样品PCR检测结果如图3所示，阳性对照样品和阳性检出样品的电泳谱图在231bp处出现目的条带，而空白对照样品和阴性对照样品均无条带。

表3 中国对虾仔虾中TSV的检测结果

图3 部分中国对虾仔虾样品TSV PCR电泳谱图

2.4 凡纳滨对虾仔虾中TSV检测结果

2014年～2018年对凡纳滨对虾仔虾中TSV的检测结果（见表4）显示，五年间TSV均有检出，阳性率分别为13.6%、9.5%、6.7%、14.8%、11.1%。部分对虾样品PCR检测后，电泳谱图，如图4所示。

表4 凡纳滨对虾仔虾中TSV的检测结果

图4 部分凡纳滨对虾仔虾样品TSV PCR电泳谱图

3 讨论

从2014年～2018年五年间对中国对虾仔虾和凡纳滨对虾仔虾中WSSV和TSV的监测结果看，我国对虾仔虾WSSV的阳性率明显高于凡纳滨对虾；而凡纳滨对虾仔虾TSV的阳性率明显高于中国对虾。这说明WSSV较易感染中国对虾，而TSV较易感染凡纳滨对虾。

众所周知，WSSV的感染力极强，是对虾类危害较大的一种病毒。WSSV传播速度较快，对虾感染后死亡率可高达100%，在1993年爆发以来，其对全球对虾养殖业危害严重，经济损失巨大（Cavalli LS et al,2008；薛晖等，2010）[4,5]。在对WSSV阳性检出的苗种场家跟踪调查中也发现，中国对虾仔虾感染后，死亡速度较快，几乎全部死亡；而且还发现前一年WSSV阳性检出的苗种场家，下一年阳性检出的几率也较高。五年间凡纳滨对虾仔虾中WSSV阳性率较低，危害较轻。冯亚萍等的研究结果显示，中国对虾野生群体对WSSV的敏感性高于凡纳滨对虾[6]；而且不同温度下凡纳滨对虾耐受WSSV能力也要高于中国对虾[7]。Tsai et al研究也显示凡纳滨对虾对WSSV有一定的抵抗力，死亡率与养殖环境和管理水平呈现负相关，存活个体终生带毒[8]。

TSV主要侵害凡纳滨对虾，1992年首次发现于厄瓜多尔桃拉河（Taura）地区，因此而得名。五年间对中国对虾仔虾和凡纳滨对虾仔虾TSV监测结果显示，凡纳滨对虾仔虾TSV阳性率为6.7%～14.8%；而中国对虾仔虾TSV只在2014年和2018年各有1例阳性检出。因此，说明TSV对凡纳滨对虾危害较大，这与冯东岳等的研究结论一致[9]。

中国对虾是一种暖水性大型虾类，经济价值极高，是黄渤海主要捕捞对象和支柱产业，也是我国重要的土著海水养殖种类之一。为了保护这一资源，辽宁省从1984年开始实施大规模增殖放流工作。凡纳滨对虾俗称南美白对虾，于20世纪80年代从夏威夷引入我国。因其适应能力强、壳薄肉肥、味道鲜美，养殖地域和养殖规模不断增大，属于世界上养殖最多、产量最大的三大虾类之一。近几年，我国关于对虾病害的报道屡见不鲜，不再是单一的病原，而呈现多样化[10]。作为一名水产苗种管理工作者，对虾养殖病害防控工作面临巨大的挑战。为有效地控制辽宁省对虾病害的发生。一是要加大养殖对虾流行疾病的监测力度，对已知病原进行普查，而及时有效地指导防控工作；二是要尽早全面开展水产苗种产地检疫工作，防止水产苗种带病流通，确保对虾养殖健康可持续发展。