曹丁　李学优　昝继清　兰玲峰　甘祥武

摘要：旨在利用毕赤酵母密码子的偏好性和遗传简并性，将鸡α干扰素优化基因片段cIFN-α[STBX]2[STBZ]连入毕赤酵母表达载体pPIC9k，再经重叠延伸PCR方法去除重组质粒的5′端非翻译区多余的8个核苷酸GGATCCAA，使其与毕赤酵母AOX1（醇氧化酶）的5′端非翻译区的序列完全一致，构建并筛选重组毕赤酵母，并进行摇瓶诱导表达试验。将表达产物用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行检测，并用微量病变抑制法检测其抗病毒效价。抗病毒活性检测结果显示，天然基因、优化基因、质粒5′端非翻译区改造后的优化基因重组质粒表达产物的抗病毒效价分别为105、106、1.5×106 U/mL。鸡α干扰素基因优化后的抗病毒效价提高了10倍，对质粒5′端非翻译区进行进一步改造后，表达蛋白的抗病毒活性提高了50%，从而为鸡α干扰素的工业化生产奠定了基础。

关键词：鸡α干扰素;真核表达;pPIC9k;分泌表达;抗病毒活性

中图分类号： Q786文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2019）19-0068-04

收稿日期：2018-09-16

基金项目：广州市科技计划（编号：201610010087）。

作者简介：曹 丁（1986—），女，河南南阳人，硕士，高级工程师，主要从事生物农业工程方面的研究。E-mail：caoding218@163.com。

干扰素是一类能够诱导人及动物细胞产生多种广谱抗病毒蛋白的类激素蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等生物学活性，可有效解决禽类的疫病泛滥问题，并能够解决应用抗生素造成的菌群失调、出现耐药性菌株及药物的不良反应等问题[1-2]。毕赤酵母是近年来发展起来的一种以甲醇为碳源的真核表达系统，酵母可对异源蛋白进行修饰，采用有信号肽的质粒时，蛋白能被正确折叠和加工，然后被分泌到培养基中。……