朱卫华 赵亭 赵万升 李静 范明杰 张莉莉 李玉峰

中图分类号：S858.314.4+3     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2019）11-0051-03

鸭病毒性肠炎（Duck viral enteritis，DVE）又称鸭瘟，是雁形目鸭科成员的一种急性、接触性、败血性传染病，主要侵害宿主的消化道、内脏和淋巴器官，造成消化道出血、淋巴器官受损和实质性器官的退行性病变。该病呈世界分布，在我国主要养鸭地区广泛存在，但主要呈地方性流行。该病的病原是鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus， DEV），现归于疱疹病毒科马立克氏病毒属。该病毒可以感染各品种和日龄的鸭，发病率和死亡率最高可达100%，是对鸭致病性最强的病原之一，一旦感染往往会对鸭群造成严重损失。黄引贤等[1]最早于1959年报道了该病在我国的存在，之后我国研发出了针对该病的弱毒疫苗，起到了较好的防控效果。

鸭圆环病毒（Duck circovirus，DCoV）感染最早报道于德国[2]，据称能够引起鸭生长迟滞，发育不良，并造成鸭免疫抑制增加其他病原继发感染的可能。DCoV呈世界性分布，流行病学调查发现其在养鸭业中的阳性率较高。DCoV可以感染北京鸭、番鸭等多个品种，根据其基因组结构可以分成I型和II型[3]，目前在我国主要养鸭地区流行毒株以I型为主。

近来某养殖公司陆续出现育成期种鸭发生DVE的病例，发病时间多在10～16周龄，发病鸭群表现精神不振，采食量下降，排白色或绿色稀粪，死亡率达到每天1%～3%，经实验室诊断为DEV与DCoV混合感染，现报道如下：

1  材料与方法

1.1  病料采集与处理  发病鸭来自山东地区某种鸭场15周龄育成鸭，外观精神萎靡，有的表现头颈肿大。剖检可见心肌出血或心肌苍白，肝脏肿大出血，脾脏斑驳状或者出血，有的胰腺坏死;肠道有明显的肠炎症状，泄殖腔出血明显。多数病死鸭食道有典型的条纹状出血或坏死。采集病死鸭肝脏、脾脏和胰腺等作为病料，混合后以1：5比例加入灭菌生理盐水，使用组织匀浆机将病料打碎形成混悬液，置-80℃冻融2次，4℃ 8000g离心15min，取上清进行实验室PCR检测。

1.2  实验室PCR诊断  病料上清按照试剂盒（Axyen）方法提取病毒核酸，利用本实验室设计的针对禽流感病毒（AIV）、鸭肠炎病毒（DEV）、鸭肝炎病毒（DHV）、鸭呼肠孤病毒（DReoV）、鸭细小病毒（DPV）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）和鸭圆环病毒（DCoV）等常见病原的引物，通过PCR或RT-PCR方法进行病毒核酸检测。

1.3  病毒分离  病料上清加入适量抗生素（卡那霉素1000IU/mL），混合后通过绒毛尿囊膜途径接种12日龄健康鸭胚，每胚0.1mL。接种后每天观察鸭胚死亡情况，收集死亡鸭胚绒尿膜和尿囊液，按照以上方法进行实验室PCR核酸检测。

1.4  动物回归试验  将病毒分离物以生理盐水1：100稀释，通过肌肉注射途径接种5只10日龄健康雏鸭，每只接种0.2mL，另设5只作为对照，肌肉注射生理盐水0.2mL/只，每天观察记录试验鸭发病和死亡情况。采集死亡试验鸭肝脏、脾脏等病料进行实验室病毒核酸检测。

2  结果

2.1  实验室PCR检测  病毒核酸检测结果显示，DEV和DCoV-I型为阳性，其他常见病毒均为阴性。结果见图1。

2.2  病毒分离  病料接种鸭胚于接种后72～96h死亡，死亡鸭胚表现绒尿膜水肿，胚体出血。分离病毒核酸检测结果为DVE阳性，其他病毒均为阴性，结果见图2。

2.3  动物回归试验  攻毒组试验鸭于攻毒后96h开始发病，表现精神沉郁，食欲废绝，于144h全部死亡，剖检可见肝脏坏死出血，食道条纹状出血等典型病毒性肠炎症状，5只试验鸭病料实验室检测均为DEV阳性，结果见图3。

综合实验室PCR检测、病毒分离和动物回归试验结果，将该病例判定为鸭病毒性肠炎与圆环病毒混合感染。

3  讨论

DVE是养鸭生产中的传统疫病，一般呈地方流行或散发，但该病近年来有发病增加趋势。根据从业者反映，现有的弱毒疫苗对该病的保护率有所下降，鸭群发生病毒性肠炎后用弱毒疫苗紧急免疫效果不理想，有的养殖场发病后将紧急免疫剂量提高到十倍以上仍不奏效。自2006年以来，国内多次出现“新型鸭瘟”疫情的报道[4， 5]，该疫情的流行特点、发病症状等均与传统病毒性肠炎相似，病原也具有疱疹病毒的特征，但中和试验证明其与DEV不同。近年来的病例实验室诊断结果病原仍是DEV，弱毒疫苗也具有一定的保护效果，说明这些病例不是“新型鸭瘟”。报道显示，这些流行毒株与疫苗株和原参考株仅有个别基因差异，从分子水平来看没有发生明显变异[6， 7]。

在本病例中，除DEV以外还检测到DCoV-I型病毒。DCoV自发现以来，世界上多个国家报道了该病原的存在，我国的福建、浙江、广东、广西、山东、安徽、河南等主要养鸭地区均有该病报道，流行病学调查显示以上主要省份DCoV感染总阳性率在30%左右，而个别鸭场阳性率可达80%以上[8]。感染DCoV病鸭表现为生长迟缓、体况消瘦、羽毛发育障碍等症状，病理学分析表明DCoV可以造成法氏囊、胸腺、脾脏、肝脏等器官损伤，尤其是引起淋巴细胞凋亡而造成免疫抑制，从而加剧其他病原的致病性[9]。由于DCoV感染普遍存在，近来DVE病例经常能够同时检测到DCoV，因此推测这可能是DVE免疫失败的原因之一。但是，由于缺乏实验证据，DEV和DCoV是否能够协同致病以及其协同致病机理仍需进一步研究。

DCoV目前尚无有效的分离培养方法，也没有商品化的疫苗产品可供使用（因此在病毒分离时，仅分离到DEV）。对于该病的防控只能采取严格的生物安全手段，避免使用劣质的粗制抗体以防止该病的人为传播。另外，还应该关注该病在父母代及祖代种鸭上的感染情况，必要时采取有效的净化措施，切断病毒的垂直传播途径。

参考文献：

[1]  黄引贤，欧守杼，邝荣禄，等. 鸭瘟病毒的研究 [J]. 华南农学院学报， 1980， （01）： 21-36.

[2]  Hattermann K.， Schmitt C.， Soike D.， Mankertz A. Cloning and sequencing of Duck circovirus （DuCV） [J]. Archives of virology， 2003， 148（12）： 2471-2480.

[3]  萬春和，程龙飞，傅光华，等.鸭圆环病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型PCR-RFLP鉴别诊断方法的建立[J].中国家禽， 2016， 38（17）： 53-55.

[4]  刁有祥，吕桂霞，郑福英，等.一种新型鸭瘟病原的分离鉴定及其特性[J].中国兽医学报， 2006， （02）： 136-139.

[5]  丁巧玲，袁生，李建军，等.广东部分地区发生“新型鸭瘟”的初步诊断报告[J].广东畜牧兽医科技，2006，（04）： 28+32.

[6]  傅光华，陈翠腾，刘荣昌，等.鸭瘟病毒新近分离毒株部分基因变异分析[J].畜牧兽医学报，2018，49（10）：2215-2222.

[7]  姜甜甜， 张大丙. 鸭瘟强毒与疫苗毒的囊膜糖蛋白序列比较 [J]. 中国兽医杂志， 2013， 49（02）： 3-7.

[8]  黄瑜，万春和，彭春香，等.鸭圆环病毒感染的临床症状 [J].中国家禽， 2013， 35（05）： 47-48.

[9]  李鹏飞.鸭圆环病毒在人工感染雏鸭体内的侵染分布、组织病理学观察及其致凋亡作用的研究[D].雅安： 四川农业大学， 2015.