渠 巍，梁 璐，文春蓉，鲁衍强，汤 萍，胡季芳△，杨 琦

(1.贵阳市妇幼保健院检验科，贵阳 550003；2.上海张江普汇转化医学研究院，上海 201210；3.中国疾病预防控制中心妇幼保健中心，北京 100081)

出生缺陷是指胎儿在出生前，在母体子宫内便已发生了发育异常[1]，是导致早期流产、死胎，围产儿、婴幼儿死亡和残疾的主要原因之一[2]。据统计，我国出生缺陷总发生率约为 5.6%，近年来，出生缺陷总发生率呈上升趋势。出生缺陷不仅是造成儿童残疾的重要原因，也日渐成为儿童死亡的主要原因[3]。

叶酸是人体内重要的水溶性维生素，参与机体蛋白质、核酸等重要成分的合成与修饰，在细胞分裂、胚胎发育中具有十分重要的作用。大量研究证实，叶酸缺乏可导致胎儿神经管畸形、先天性唇腭裂、高同型半胱氨酸血症，还和某些出生缺陷的发生、发展有密切关系[4-5]。此外，叶酸代谢障碍也与女性胚胎停育、习惯性流产、妊娠期高血压等病症相关[6-8]。

5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)是叶酸代谢通路中的关键酶，大量国内外研究表明，其基因多态性差别是导致个体叶酸代谢个体化差异的主要原因[9-13]。本研究以贵州省汉族、布依族育龄女性为研究对象，并对其民族组成进行分析，检测受检者MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因分型，获取其在该地区人群的分布特征，从而为当地制订叶酸个性化补服方案提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年12月至2019年1月在贵州省妇幼保健院就诊的育龄女性为研究对象，其中汉族女性2 719人，平均年龄(33.0±5.7)岁；布依族女性371人，平均年龄(33.7±5.4)岁。均获得受检者知情同意。

1.2 研究方法 采用国家妇幼保健中心指定采样拭采集受检者的口腔黏膜细胞，柱式质粒DNA小量抽提试剂盒提取样本DNA。Taqman-MGB探针(表1)荧光定量PCR检测MTHFR C677T/A1298C和MTRR A66G的位点多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。相关仪器、试剂均购于美国ABI公司。反应结束后在ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光。采用Hardy-Weinberg平衡分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性，利用分析软件(ABI SDS 2.3)确定各个样本的基因分型结果。

1.3 统计学处理 采用SPSS19.0进行统计学分析。不同地区间样本基因型及等位基因频率比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。采用HaploView4.2软件进行单核苷酸多态性的Hardy-Weinberg平衡分析。

2 结 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析 研究对象布依族、汉族女性编码MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G的位点基因多态性均符合Hardy-Weinberg遗传平衡，其中汉族：χ2分别是0.86、1.00、0.00；布依族：χ2分别是2.01、1.27、1.87(P>0.05)。

2.2 基因型和等位基因频率分布比较

2.2.1 贵州省汉族女性和布依族女性的比较 贵州省汉族女性与布依族女性MTHFR C677T 、MTHFR A1298C位点基因型频率和等位基因频率相比差异有统计学意义(P<0.05)，且叶酸代谢关键酶基因位点风险基因型MTHFR 677CT、677TT比较中，汉族女性高于布依族女性；汉族女性MTRR A66G位点基因型频率与等位基因频率与布依族女性比较差异无统计意义(P>0.05)。见表2、3。

2.2.2 贵州省汉族女性MTHFR(C677T、1298C)与MTRR(A66G)与其他地区汉族女性比较 贵州省汉族女性MTHFR C677T 位点基因型(CC、CT、TT)频率和等位基因频率与湖北、海南、长春、新疆、廊坊、银川、淄博、郑州、苏州、眉山、湘潭、南宁、阳江等地汉族女性比较差异有统计学意义(P<0.05)，其中贵州汉族女性风险基因型MTHFR 677CT、677TT频率低于长春、新疆、廊坊、银川、淄博、郑州、苏州、湖北、眉山地区汉族女性，高于湘潭、南宁、阳江、海南汉族女性，风险基因型所占比例呈现北方高于南方的趋势；当地汉族女性MTHFR A1298C位点基因型(AA、AC、CC)频率和等位基因频率与长春、廊坊、淄博、郑州、苏州、湖北、湘潭、南宁、阳江、海南地区汉族女性比较差异有统计学意义(P<0.05)，其中风险基因型MTHFR 1298AC、1298CC频率高于长春、廊坊、淄博、郑州、苏州、湖北，低于湘潭、南宁、阳江、海南；MTRR A66G位点基因型(AA、AG、GG)频率与等位基因频率与淄博、阳江、海南汉族女性比较差异有统计学意义 (P<0.05)，且风险基因型MTRR 66AG、66GG 频率高于淄博汉族女性，低于阳江、海南汉族女性。见表4、5。

2.2.3 贵州省布依族族女性和其他地区少数民族女性的比较 贵州省布依族女性MTHFR C677T 位点基因型频率和等位基因频率与延边朝鲜族、辽源满族、银川回族、利川土家族、张家界土家族、思南土家族、思南苗族、大理白族、南宁壮族、柳州苗族、海南黎族比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中MTHFR 677CT、677TT基因型频率低于延边朝鲜族、辽源满族、银川回族、利川土家族、张家界土家族、思南土家族、思南苗族、大理白族，高于南宁壮族、柳州苗族、海南黎族；MTHFR A1298C位点基因型频率与延边朝鲜族、利川土家族、张家界土家族、大理白族、南宁壮族、海南黎族间比较差异有统计学意义(P<0.05)，且MTHFR 1298AC、1298CC基因型频率高于延边朝鲜族、利川土家族、张家界土家族、大理白族、南宁壮族，低于海南黎族；MTHFR A1298C位点等位基因频率与三亚黎族比较差异有统计学意义(P<0.05)，MTRR A66G位点基因型频率与等位基因频率与新疆维吾尔族、西藏藏族、银川回族、海南黎族比较差异有统计学意义(P<0.05)，且贵州布依族女性MTRR 66AG、66GG 基因型频率高于以上4个民族。见表6、7。

表1 Taqman-MGB探针所在位置

表2 贵州汉族与布依族女性MTHFR、MTRR基因型频率比较[n(%)]

表3 贵州汉族与布依族女性MTHFR、MTRR等位基因频率比较[n(%)]

表4 贵州汉族女性与其他地区汉族女性MTHFR、MTRR基因型频率比较[n(%)]

续表4 贵州汉族女性与其他地区汉族女性MTHFR、MTRR基因型频率比较[n(%)]

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表5 贵州汉族女性与其他地区汉族女性MTHFR、MTRR等位基因频率比较[n(%)]

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表6 贵州布依族与其他地区少数民族女性MTHFR、MTRR基因型频率比较[n(%)]

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表7 贵阳布依族与其他地区少数民族女性MTHFR、MTRR等位基因频率比较[n(%)]

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3 讨 论

MTHFR和MTRR是叶酸代谢过程中的关键酶，MTHFR催化5,10-亚甲基四氢叶酸生成5-甲基四氢叶酸，而后者作为甲基传递的重要载体，使同型半胱氨酸生成甲硫氨酸，MTHFR 677位点C被T取代后，编码的丙氨酸被缬氨酸代替， 导致酶的耐热性和活性下降，研究发现与CC型酶活性相比，CT型酶活性为56%，TT 型酶活性只有22%，将严重影响叶酸在体内的有效利用，增加神经管畸形、先天性心脏病、唇腭裂等出生缺陷的发病风险[36]。

贵州省2010—2014年出生缺陷监测医院共监测围产儿557 081例，出生缺陷儿共7 232例，出生缺陷总发生率为129.82/万[37]。叶酸增补是我国目前针对出生缺陷一级预防的主要措施之一，虽然我国在2009年实行农村育龄女性免费增补叶酸的公卫政策，但对神经管畸形的预防作用在各地也存在差异。孕妇体内叶酸水平受饮食习惯、地域、遗传等因素的影响，对营养的需求因人而异，对备孕及已怀孕的女性进行叶酸利用能力的评估，有助于了解机体对叶酸的利用能力，制订个性化的营养干预方案。本研究通过对贵州省育龄女性的叶酸代谢利用能力进行基因分型检测，调查贵州省汉族女性、布依族女性的叶酸代谢关键酶MTHFR和MTRR基因位点多态性，该研究数据丰富了我国少数民族生物样本信息库，同时为后续研究营养、遗传、环境对出生缺陷影响，制订个体化的叶酸营养干预方案提供了分子医学基础数据。