郑 巍，刘晓娟，贾 琳，陈海生，郭良君，金永生

(1.海军军医大学药学院，上海 200433；2.解放军第九八医院药械科，浙江 湖州 313000；3.厦门市医药研究所，福建 厦门 361003；4.解放军第四五四医院药学部，江苏 南京 210000)

红花五味子Schisandra rubriflora (Franch).Rehd.et Wils.是木兰科五味子属多蕊五味子亚属植物，主产于甘肃南部、湖北、四川、云南西部及西南部、西藏东南部等地[1-2]。民间将其果实入药，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功用；枝干入药，具有活血、祛风、除湿之功效[2-3]。国内外对红花五味子化学成分的研究报道主要体现在对其果实、枝、叶等部位的木脂素、萜类化合物的分离鉴定、含量测定及其抗HIV-1活性、降低谷丙转氨酶(SGPT)活性的研究[4-12]。在挥发油研究方面，有文献报道了其叶和枝中挥发油成分主要为倍半萜类化合物，含有少量的烷烃、醇、酮、醛、酯类成分[13]。总体上，对于红花五味子茎的研究较少，为了研究红花五味子的化学成分以及扩展药材的来源范围，本文以红花五味子茎为研究对象，首次采用醇提后石油醚萃取的方法得到低极性部位，再采用气相色谱-质谱的方法进行分析，并将其结果和NIST08光谱数据库进行匹配分析，最终鉴定了49个化合物，同时运用峰面积归一法通过Xcalibur化学工作站数据处理系统测得各个化学成分的质量百分数。

1 材料

气相色谱Thermo Trace GC Ultra(美国赛默飞世尔公司)，质谱Thermo DSQ Ⅱ， Xcalibur工作站。红花五味子茎于2012年采自云南西双版纳，经第二军医大学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定为红花五味子Schisandra rubriflora (Franch).Rehd.et Wils.的干燥茎。所有试剂均为市售分析纯试剂，水为重蒸水，载气为高纯氦气。

2 方法

2.1 低极性化学成分的制备

红花五味子茎10 kg，粉碎后，以90% 乙醇回流提取3次，每次2 h，提取液经滤过、减压回收溶剂得到无醇味浸膏(5 L)。将所得浸膏悬浮于2 L水中后，用石油醚(60～90)℃萃取6次，每次1 L，减压回收溶剂得到石油醚浸膏7 g。取100 mg浸膏，置于10 ml 量瓶中，加入80%甲醇，超声、加热使其几近完全溶解，放置、冷却；再加入80%甲醇定容，摇匀、放置；吸取 1ml定容后的浸膏液，微孔滤膜过滤后待测。

2.2 色谱条件

色谱柱TR-35MS石英毛细管(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，程序升温，起始温度40 ℃，保持 2 min后以10℃/min的速度升至300 ℃并保持5 min；汽化温度250 ℃，进样量1 μl；分流比10∶1。载气是高纯氦气，流速1.0 ml/min。

2.3 质谱条件

离子源：EI源；离子源温度250 ℃；电子能量：70 eV；扫描范围：50～650m/z。

2.4 分析方法

按“2.2”、“2.3”项下实验条件对红花五味子茎石油醚提取物进行分析，30 min得到红花五味子茎低极性化学成分的总离子流图，如图1所示。共检测出126个峰，通过检索NIST08光谱数据库，按60%以上匹配率(SI和RSI均大于600，最大值1000)，并结合质谱裂解规律确定其化学成分。运用峰面积归一法通过Xcalibur化学工作站数据处理系统，测得各个化学成分在石油醚部位中的质量百分数。

3 结果

本次检测共鉴定出49个化合物，结果如表1所示。统计出本次所测红花五味子茎的低极性化学成分中含有烷烃11个(8.03%)，酯类21个(45.94%)，脂肪酸7个(19.35%)，倍半萜2个(13.94%)，其他醇、酮、醚类成分8个，其中含量较高的两个主要化学成分是：β-芹子烯(12.08%)(见图2)、顺，顺-2-甲基-3，13-十八烯醇(10.3%)(见图3)。

图1 红花五味子茎低极性化学成分总离子流图

序号保留时间(t/min)相似度SI值相似度RSI值化合物含量(%)18.2657962226-(乙酰氨基)糠醛-5-烯-3-乙酸酯0.2428.776887472-(7-十七烷氧基)四氢-2H-吡喃0.3039.186556955,8-二乙基-十二烷0.3049.517518052,6,10-三甲基十四烷0.4859.588488882-甲基十三烷2.0669.82919928β-芹子烯12.0879.92839868α-芹子烯1.86810.327818752,6,11-三甲基十二烷0.83910.50631685异戊酸香叶酯0.231011.296857992,2,4-三甲基-3-羧基异丙基异丁酯-戊酸0.27

(续表)

图2 β-芹子烯 图3 顺，顺-2-甲基-3，13-十八烯醇

4 分析与讨论

本研究首次对经乙醇热提后再用石油醚萃取法获得的红花五味子茎的低极性化学成分进行了GC-MS分析，所测结果和文献[13]采用超声辅助石油醚提取法获得红花五味子叶和枝的挥发油研究结果相比，差异较大。本法所获得红花五味子茎低极性成分经分析含有酯类化合物21个(45.94%)，脂肪酸7个(19.35%)，烷烃11个(8.03%)，而倍半萜只有2个(13.94%)；文献[13]中红花五味子叶和枝挥发油中倍半萜有45个(72.4%)，而酯类只有6个(5.9%)，烷烃3个(1.1%)，另外两者的化学成分除了芹子烯外其他没有重合。分析原因，除了提取方法的不同外，药材的研究部位不同以及药材的产地、采收时间等都可能是产生差异的原因，另外，还有个重要因素，就是本次实验距离药材采集时间较久，其中的易挥发性成分，如倍半萜可能已经挥发，有必要进一步对比分析。

本文方法所测得的脂肪酸、酯类成分种类丰富、数量多，其中亚油酸、亚麻酸等是人体必需脂肪酸；脂肪酸、酯类成分还具有抗氧化、抗肿瘤等多方面活性，这都提示了云南红花五味子可能具有较同属植物更好的药疗和保健作用。另外芹子烯是本文方法获得的含量最高的成分，药理研究表明芹子烯具有抗急性炎症的作用[14]，这也提示了本方法对于开发红花五味子抗急性炎症药物的可能性。本文方法所测得的的化合物除了芹子烯外其他48种成分都是首次从该植物中发现，丰富了红花五味子的化学成分。