魏晓雷 叶汉梅 罗 智

(华中农业大学水产学院，武汉 430070)

细胞自噬是生物体进化过程中的一种保守机制, 通过降解细胞质中受损细胞器或蛋白以维持生物体的稳态[1]。迄今为止, 在酵母模型系统中已经鉴定出30多种自噬相关基因(Autophagy-related genes, ATGs), 这些自噬相关基因参与了细胞选择或非选择性的自噬功能, 而且这些基因中的大多数在真核生物中具有同源物[2]。微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3 orLC3)是酵母Agt8基因在哺乳动物中的同源类似物。在黄颡鱼中, LC3有2个亚型, 包括LC3A和LC3B[3]。LC3在细胞中合成后经过加工成为胞质型LC3-Ⅰ。细胞在面临各种应激情况下, 自噬水平改变, LC3-Ⅰ的一部分转换成膜结合型LC3-Ⅱ并与自噬泡结合[4]。LC3-Ⅱ是公认的自噬体存在的标志分子, Western blot检测LC3-Ⅱ蛋白含量变化是目前检测自噬常用的方法[5]。Beclin1是酵母Atg6基因在哺乳动物中的同源类似物, 在多种生物中高度保守[6]。Beclin1通过与ClassⅢ PI3K形成复合物参与自噬体的形成, Beclin1是调节自噬过程的关键性蛋白质, 是自噬启动的标志分子[7]。Beclin1作为调控自噬形成的关键基因, 参与了很多蛋白质的修饰调控, 进而调控自噬体的形成[8,9]。

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)是我国内陆淡水地区重要养殖的经济鱼类, 最近我们实验室克隆得到了黄颡鱼自噬发生关键基因的cDNA序列[3,10],探讨了自噬介导锌影响黄颡鱼脂类代谢的机制[11]。多克隆抗体具有识别抗原表位多、制备时间短、成本低等优点, 可以应用于免疫印迹、酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫组化等实验, 成为科研中不可或缺的一部分。然而, 到目前为止, 还没有高质量的黄颡鱼LC3和Beclin1抗体, 很大程度限制了对黄颡鱼自噬调控的深入研究。……