美司钠注射液细菌内毒素检查法研究

2019-11-19冯亮刘益庆

医药前沿 2019年29期

冯亮刘益庆

（1 江苏省东海县产品质量和食品安全综合检验检测中心药理室江苏连云港 222300）

（2 连云港市食品药品检验检测中心药理室江苏连云港 222000）

美司钠注射液为预防环磷酰胺、异环磷酰胺、氯环磷酰胺等药物的泌尿道毒性[1]。现有的该品种检测标准“中国药典”2015年4期9301版“注射安全检验方法应用指南”[2]。有必要对该品种建立细菌内毒素检测方法。细菌内毒素检测方法快速，敏感，准确，符合3R原则[3-4]，逐步取代兔热原试验方法。本研究建立了美司注射液细菌内毒素检查，大大提高了临床用药的安全性。

1.实验材料

细菌内毒素工作标准品(中国食品药品检定研究院，批号：150601-201885，效价：80EU/支)；鲎试剂(TAL，湛江安度斯生物有限公司，规格：0.1mL/支，批号：1710162，灵敏度：0.25EU·mL-1；湛江博康海洋生物有限公司，规格：0.1mL/支，批号：1711092，灵敏度：0.25EU·mL-1)；细菌内毒素检查用水(BET水，中国食品药检监督检定研究院，规格：5mL/支，批号：160006-201704；美司钠注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：170126，规格：4ml：0.4g ；批号170312,规格：4ml：0.4g；批号170617，规格：4ml：0.4g）；仪器ZH-2BLENDER型旋涡混合器(天津药典标准仪器厂)；MET-50 型智能恒温仪(天大天发科技有限公司)；GZX-9146MBE型电热鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司)。

2.方法与结果

2.1 鲎试剂敏感性检查

根据中国药典，2015年版四部通则1143，鲎试剂敏感性试验[5]，所测试的鲎试剂的灵敏度值均在0.5λ至2.0λ的范围内，符合要求，见表1。

表1 鲎试剂敏感性试验结果

2.2 样品内毒素限制L的确定

细菌内毒素限量公式L=K/M，其中K是每人每公斤体重最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5EU·(kg·h)-1；每千克体重用于人体的M以小时计的最大剂量。

对照用药说明书，该药的常用剂量为20%环磷酰胺，异环磷酰胺，氯磷酰胺剂量，静脉滴注或静脉滴注，给药时间为0小时（与细胞抑制剂同时），4小时后和8小时后，儿童的给药频率应相对较频繁（例如6次），间隔时间较短（例如3小时）。

根据环磷酰胺注射规范，成人常用量：单药静脉注射体表面积500～1000mg/m2，加生理盐水20～30ml，静脉注射，每周一次，每次2次，休息1～2周，重复。人的体表面积按1.62m2计，注射用环磷酰胺最大剂量27mg/kg，美司钠注射液最大剂量5.4mg/kg，K=5EU/Kg，L=K/M=5EU/Kg/5.4 mg/Kg=0.926EU/mg，由于该药为联合用药，可严格至限值的1/2或者1/3，因此，限制设定为0.3EU·mL-1[6]。

2.3 干扰测试预实验

凝胶法用于检测细菌内毒素。鲎试剂的灵敏度为0.03～0.5 EU·mL-1，L=0.3EU·mL-1，试验样品用 BET 水制成 60,120,240,500，1000倍系列浓度的溶液，并将获取的溶液作为试验溶液（NPC），制备一系列含有2λ细菌内毒素的各稀释比的试验阳性对照溶液（PPC）。使用鲎试剂进行干扰预试验，敏感度为0.25EU/mL-1。从表2中初步确定，三批Mesna注射液稀释60倍，不干扰鲎试剂与内毒素的反应，见表2。

表2 美司钠注射液细菌内毒素干扰试验预试验结果

2.4 正式干扰试验

根据预测试结果，从不同批次中取出三批测试样品，并用BET水稀释1：60倍作为测试溶液。细菌内毒素工作标准分别由试验溶液和BET水制成,使用浓度为2λ、λ、0.5λ和0.25λ的溶液，两种不同制造商生产的灵敏度为0.25 EU·mL-1。根据《中国药典》2015年版四部通则 1143细菌内毒素试验凝胶法干扰试验操作。不同批次的TAL和WSE反应之间没有干扰,Mes注射钠以1：60稀释，见表3。