何小丽 李凡飞 王文佳

摘要：为对牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）gB基因进行原核表达，并对表达产物进行抗原性分析，利用笔者所在实验室已构建好的gB-BL21重组阳性菌落，进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，并对培养及诱导表达条件（IPTG最佳浓度、作用时间）等影响表达的因素进行优化，然后将表达的gB重组蛋白进行亲和层析纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果表明，gB蛋白在大肠杆菌中高效表达，表达蛋白的相对分子量约为32.4 ku，与预期的蛋白大小一致。经BCA（聚氰基丙烯酸正丁酯）蛋白含量测定试剂盒测定，gB重组蛋白浓度为 1.84 mg/mL。Western Blot结果显示，纯化后的gB重组蛋白能被标准IBR阳性血清识别，说明表达的目的蛋白具有良好的反应原性，可作为IBRV检测的特异性抗原。试验为建立牛传染性鼻气管炎诊断方法及研究gB蛋白的功能特性提供了材料和技术理论支持。

关键词：牛传染性鼻气管炎;gB蛋白;原核表达;纯化;抗原性分析

中图分类号：S852.4+3   文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2019）17-0189-04

牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinotracheitis，简称IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus，简称IBRV）[又称为牛疱疹病毒1型（BHV-1）]感染所引起的高度接触性传染病。该病具有广泛的嗜组织性，在临床上表现为呼吸道型、生殖道感染型、脑膜脑炎型和流产型4种类型。该病呈世界性广泛分布，世界动物卫生组织将其列为二类动物传染病，每年都给全球的养牛业带来了不可估量的经济损失[1]。BHV-1基因组中已被编码为蛋白的共有73个开放阅读框[2]。BHV-1编码的结构蛋白有33种，其中13种蛋白与核衣壳有关，10种编码糖蛋白[3]。……