张晓东 李彩霞 王元忠

摘要：克隆滇龙胆7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因GrDL7H，并进行表达分析，为龙胆苦苷生物合成途径的解析奠定基础。根据滇龙胆转录组GrDL7H序列，使用RT-PCR（逆转录PCR）和3′RACE（cDNA末端快速扩增）技术从滇龙胆幼叶中克隆该基因及其启动子，并进行序列分析和组织特异性表达分析。结果表明，GrDL7H基因（登录号：KT306971）全长2 154 bp，包含5个外显子和4个内含子，其中GrDL7H基因（登录号：KP340980）开放阅读框长 1 542 bp，编码513个氨基酸;GrDL7H蛋白质相对分子质量为59.08 ku，等电点（pI值）为8.88，属于CYP450蛋白超家族成员，可能定位于叶绿体;GrDL7H蛋白质无信号肽，为亲水稳定蛋白质，主要由α-螺旋和环构成;GrDL7H蛋白质具有CYP450蛋白质保守结构域，功能为参与氧化还原反应;滇龙胆GrDL7H蛋白质与黄金鸡纳树CcDL7H蛋白质的亲缘关系最近;GrDL7H基因启动子主要包含6个光应答元件、1个赤霉素应答元件、6个参与茉莉酸甲酯应答的顺式调控元件和1个热胁迫应答元件等;组织特异性表达分析结果表明，GrDL7H基因主要在叶片中表达。

关键词：滇龙胆;7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶;基因克隆;表达分析

中图分类号： S188;Q78  文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2019）17-0076-06

滇龙胆（Gentiana rigescens Franch. ex Hemsl.）为多年生草本植物，主要分布于云南、四川等地，其根部主要用来治疗肝炎和胆囊炎[1-2]。目前，由于滇龙胆的市场需求量逐年增加，野生滇龙胆遭到人为大肆破坏[3]。从合成生物学角度来看，滇龙胆的主要药效成分为龙胆苦苷，要大量合成龙胆苦苷，首先必须先弄清龙胆苦苷的生物合成途径及其调控机制。

萜类生物合成途径包括基本前体形成、碳骨架结构形成和萜类化合物的结构后修饰3个阶段[4]。……