李晶 李淑平 *张焕春 王新语 张福兴 孙庆田

（1 烟台大学生命科学学院，烟台264005；2 山东省烟台市农业科学研究院， 烟台265500)

根癌病是一种世界性植物细菌病害， 由土壤中的根癌土壤杆菌通过植物根或茎的伤口入侵后形成，这种菌在土壤中的含量极为丰富，世界各地均有发生，而且寄主相当广泛，在我国，桃树、樱桃、葡萄等多种果树受到根癌病危害，尤其以樱桃最为严重。

要从根本上解决樱桃根癌病的发生， 培育抗性砧木是关键。 国内开展了樱桃抗性砧木的筛选工作，如张晓明[1]利用水培法对樱桃砧木进行了筛选，方宏筠[2]等利用组培苗接种樱桃根癌菌，来筛选抗性砧木。 这两种方法都需要先分离纯化根癌病病原菌，再进行人工接种。水培苗管理比较麻烦，需要配制营养液，且需定时更换。组培苗的管理比水培苗容易，但对樱桃砧木进行抗根癌病筛选前， 需要先得到该砧木的组培苗，前期工作量大。并且两种方法均采用人工接种，与砧木的田间发病规律有些差异，不能准确表现砧木在田间对樱桃根癌病的抗性情况。

本方法利用樱桃根癌病的田间传播规律，制造出带菌土壤环境， 对樱桃砧木田间自然接种， 能更准确地表现砧木田间对根癌病的抗性情况，筛选的砧木更具有生产应用价值。

1 材料与方法

1.1 试验地准备

抗性砧木筛选的前1 年春天， 购买带根瘤樱桃苗木，按照株行距0.3 m×0.5 m，栽植到一片地块。根据砧木筛选试验需要的规模，确定栽植面积。 翌年春天，将栽植的带瘤樱桃苗挖出，土地不要深翻。

1.2试验材料

挑选生长比较一致的13 种砧木的1 年生苗木，每个品种栽植30 株。砧木品种：马哈利、考特、吉塞拉5 号、吉塞拉6 号、毛樱桃、尖嘴红樱、优小叶、戴米尔、大叶大、优系大青叶、樱砧王、中国樱桃、东北山樱。

马哈利、考特、吉塞拉5 号、吉塞拉6 号取自烟台市农业科学研究院砧木资源保存圃，且比较常见。

尖嘴红樱：为沂蒙地区选用的樱桃砧木，采用压条繁殖； 大叶大： 从中国樱桃中选出的砧木，叶片面积是普通大青叶的4 倍，压条繁殖；优系大青叶： 烟台市农业科学研究院从中国樱桃中选出的一个品种，叶片较普通大青叶厚，色绿，压条繁殖；优小叶：从中国樱桃中选出的一个叶片比较小的优系；樱砧王：2000 年春，山东省莱阳市吕格庄镇北方果业园艺场高树才通过日本友人引入，易扦插繁殖，试验苗木为扦插繁殖；中国樱桃：种子繁殖得到；东北山樱：辽宁省常用樱桃砧木之一，具有抗寒性强、种子易繁殖等特点， 试验苗木引自大连市农科院， 种子繁殖；毛樱桃：种子繁殖得到；戴米尔：从比利时引进砧木，采用种子繁殖。

将需要进行试验的砧木品种各30 株，进行断根处理（造成伤口，易于病菌侵染），栽植到试验地块，栽植行为原定植行，其它管理措施同常规管理。 秋季落叶后起苗，洗净根系，调查砧木感染根癌病情况，从而筛选抗根癌病樱桃砧木。

1.3 调查方法

试验砧木栽植1 年后， 起苗， 用水洗净根系，调查各砧木的根癌病发病情况。选择各砧木具代表性的3 株， 小心洗净根系， 用专业版WinRHIZO（2007 年版）根系分析系统对样品图像进行分析处理，调查各砧木的根系构型。将根系平铺于透明硬塑料板上，在水中将根系展开，记录幼苗根系总长度、平均直径、总体积、总表面积和根尖数等根系构型参数。

1.4 试验地后续处理

如还需进行樱桃抗根癌病砧木筛选， 以后的试验， 可继续在这块地进行， 试验周期为1年。 如试验结束，不再利用此地块，要全园用杀细菌药剂进行灭菌处理。

2 结果与分析

2.1 各砧木的根癌病发生情况

表1 不同砧木根癌病发病率情况

秋季起苗后， 调查不同砧木的根癌病发生情况。从表1 可以看出，马哈利根癌病发病率为0，说明马哈利砧木对樱桃根癌病是免疫的。 此结果和蔡宇良[3]的研究结果相符，蔡宇良连续观察3 年发现中国樱桃的根癌病发病率为15%、30%和80%，考特连续3 年的根癌发病率为10%、17%和60%。而马哈利连续3 年的根癌病发病率均为0。 本试验结果显示，樱砧王的根癌病发病率高达92.6%，为高感根癌病砧木。同时，可验证此试验地块，已经遍布根癌菌，证实了这种自然接种方法的可靠性。

优小叶根癌病的发病率在5%以下， 属于高抗樱桃根癌病砧木； 吉塞拉6 号、 优系大青叶、 考特和戴米尔这4 种砧木的根癌病发病率在10%左右，为中抗樱桃根癌病的砧木；吉塞拉5 号根癌病发病率20%左右，划为低抗根癌病砧木；大叶大、尖嘴红缨，中国樱桃、毛樱桃和东北山樱的根癌病发病率为30%～40%，划为易感根癌病砧木。

2.2 各砧木的根系情况

秋季起苗后，调查各砧木根癌病发病情况，并用根系分析系统，对各砧木的根系总长度、总表面积、平均直径、根系总体积、根尖数进行了测定，结果如表2 所示。

表2 不同砧木根系生长情况

从根系的生长状况来看， 樱砧王的根系最发达，除根系总体积稍微小于东北山樱外，根系总长度、根总表面积、平均直径和根尖数，都远高于其它砧木；马哈利的根系最不发达，根系总长度、 根总表面积、 平均直径和根系总体积在13 种试验砧木中均为最小；发病率排第二的东北山樱，除根系总长度没有毛樱桃长，根系总体积是所有砧木中最大的， 根总表面积和根尖数在13 种砧木中排第二。

本试验研究了13 种樱桃砧木对根癌病的抗性，将生产中的砧木分成了5 个类型。试验发现，根系较发达的砧木，患樱桃根癌病的几率较高。 马哈利的根系生长状况最差，试验的30 株马哈利，都没有患病。 樱砧王的根系最发达，但根癌病患病率也最高。 这一结果在李淑平等[4]的樱桃根癌病防治试验也有体现，定植前用“禾信”生物有机肥处理后，促进了樱桃砧木根系的生长，同时，也增加了根癌病的患病率。 分析原因可能是植物生长过程中分泌一些酚类物质，生长越旺盛的植物，分泌的越多，其中，有一种名为乙酰丁香酮的物质， 已经证实可诱导vir基因表达和T-DNA 的转移。 在农杆菌介导的转基因工程中，用来增强农杆菌的侵染能力，提高外源基因的转化效率。所以，选择樱桃抗根癌病的砧木和选择樱桃砧木旺盛的根系是矛盾的，在生产中要均衡考虑。

3 结论与讨论

本试验根据樱桃根癌病的传播规律， 即短距离通过灌溉、施肥、重茬栽培等途径传播，而且病菌是通过伤口进入， 充分利用樱桃根癌病发生和传播规律使土壤带菌， 制造出利于樱桃根癌病发生的田间环境， 对抗根癌病樱桃砧木进行筛选。 与樱桃水培法和组培苗接种方法相比，田间自然接种操作简单，管理简单，且更能准确地反映砧木的田间抗病性。

通过试验可知，13 种樱桃砧木根癌病的感病率由低到高的顺序为：马哈利<优小叶<吉塞拉6 号<优系大青叶<考特<戴米尔<吉塞拉5号<大叶大<尖嘴红樱<中国樱桃<毛樱桃<东北山樱<樱砧王。 通过本次试验，发现了马哈利极抗病（0%），樱砧王极感病（92.6%）。在后续砧木筛选试验中，可采用此2 种砧木做对照。