张 瑞，吴 欣，秦永亮，李旖旎，李雅静，李永军

（河北医科大学第二医院检验科，石家庄 050000）

0 引言

乙型肝炎、艾滋病、梅毒和丙型肝炎均为血液传播性疾病，其检测结果在手术、输血等引起的医源性感染以及传染性疾病中具有重要作用。由于病毒检测存在“窗口期”，所以为了区分感染途径、避免医院内感染、防止医疗纠纷及医务人员职业暴露，对患者进行输血及手术前相关感染性标志物进行检测十分必要[1]。目前，国内有多家实验室使用西门子ADVIAcentaur XP全自动化学发光免疫分析仪检测乙肝表面抗原（HBsAg）、人类免疫缺陷病毒抗体（Anti-HIV）、梅毒螺旋体抗体（Anti-TP）及丙型肝炎病毒抗体（Anti-HCV）感染性血清标志物，但尚未见对该仪器进行感染性血清标志物的相关性能评价报道。为了保证实验室检验结果的准确性，本研究按照CNAS-CL02《医学实验室质量和能力认可准则》、CNAS-CL02-A004《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》中免疫领域的相关要求，对西门子ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪检测上述4种感染性标志物的精密度、临界值附近精密度、最低检出限、方法学间比较、分析测量范围等进行验证及评价[2-3]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

（1）质控品：采用高、低2个浓度水平，2～8℃保存。（2）常规样本：来源于本院就诊患者以及健康体检者，共留取新鲜血清标本370例，其中包括Cutoff附近精密度验证8例、方法学比较360例，分析测量范围2例，无溶血、黄疸、脂血，于-20℃保存。（3）定值标准品：来源于北京康彻斯坦定值标准品，包括HBsAg（批号 201703002）、Anti-HIV（批号 201611005）、Anti-TP（批号 201701001）和 Anti-HCV（批号 2017 01001）。

1.2 仪器与试剂

西门子ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪。西门子ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪原装配套试剂：HBsAg试剂（批号953 27190）及阴性质控品（批号040932697）、阳性质控品（批号 040932697）；Anti-HIV 试剂（批号 38011213）及阴性质控品（批号0322971）、阳性质控品（批号0322972、0322973、032 2971）；Anti-TP 试剂（批号 01 698033）及阴性质控品（批号599681957）、阳性质控品（批号599681957）；Anti-HCV试剂（批号98552269）及阴性质控品（批号001592727）、阳性质控品（批号001592 727）。校准品均为原装配套校准品。

1.3 方法

1.3.1 精密度

根据CLSI EP15-A2[4]文件，采用高、低2个浓度的质控品，每天分析一个批次，每个浓度重复检测4次，连续检测5 d（每批间隔24 h）。收集实验数据，计算批内精密度与批间精密度，即批内变异系数（coefficient of variation，CV）和批间 CV。判断标准：批内CV＜10%、批间CV＜15%则为验证通过。

1.3.2 临界值附近精密度验证

备足量且浓度位于临界值±20%浓度范围内的血清标本，每份标本重复检测20次，计算阴性率及阳性率。判断标准：临界值+20%浓度的标本检测结果阳性率≥95%、临界值-20%浓度的标本检测结果阴性率≥95%则验证通过。

1.3.3 最低检出限

最低检出限的检测可确定检测方法的临界值浓度，一般试剂盒说明书已给出检测方法的临界值浓度，但实验室需建立自己的实际临界值。将定值标准品做一系列倍比稀释，稀释比例为 1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，每份稀释后的标准品均进行5次重复检测。以5次重复检测中4次以上阳性的稀释标准品浓度作为检出限上限，以5次重复检测中4次以上阴性的稀释标准品浓度作为检出限的下限。判断标准：达到或超过实际说明书声明的检测下限为验证合格。

1.3.4 方法学间比较

分别选取临床诊断符合实验要求的HBsAg、Anti-TP、Anti-HCV阳性血清标本及阴性血清标本各50例；由于HIV阳性标本较少，选取Anti-HIV阳性标本10例、阴性标本50例，分别使用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）及化学发光微粒子免疫分析法（CMIA法）进行检测，所得结果进行Kappa一致性检验并计算Kappa值，判断2种检测方法结果的一致性。Kappa值分级：0～0.20表示极低的一致性，0.21～0.40表示一般的一致性，0.41～0.60 表示中等的一致性，0.61～0.80 表示高度的一致性，0.81～1表示几乎完全一致。

1.3.5 分析测量范围

标本未经任何处理（稀释、浓缩或其他处理），由检测系统直接得到的检测范围即为分析测量范围。以试剂厂家提供的理论线性范围收集分析测量范围上限的临床标本，低值标本可使用稀释液稀释后得到，按照一定比例混合（5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H），每个稀释度重复测定3次，计算均值，记录结果。以X表示各样本的理论预期值，以Y表示各样本的实测值，计算Y=aX+b和相关系数R2。线性范围判断标准：R2＞0.95，回归方程斜率在 0.97～1.03 范围内。

2 结果

2.1 精密度验证结果

对 HBsAg、Anti-HCV、Anti-TP、Anti-HIV 4 个指标2个不同浓度质控品进行测定，其批内及批间精密度结果见表1。

表1 批内及批间精密度验证结果%

由表1可看出，各指标批内精密度均＜10%、批间精密度均＜15%，4项指标精密度结果均在允许范围内，有较好的一致性与稳定性。

2.2 临界值附近精密度验证结果

除HBsAg项目高于临界值20%的样本符合率为95%外，其他均为100%，符合判断标准，验证通过。详见表2。

表2 临界值附近精密度验证结果

2.3 最低检出限

血清标志物 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV的最低检出限分别是0.06 IU/ml、4.00 NCU/ml、0.50 NCU/ml、1.00 NCU/ml，均在厂家提供的范围内，验证通过。

2.4 方法学间比较

表3为CMIA法和ELISA法方法学比较结果。可以得出，CMIA法和ELISA法检测HBsAg具体比对结果为：阳性符合率100%，阴性符合率100%，总符合率100%，Kappa值=1，一致程度95%，可信区间[96.3%，100%]。CMIA法和ELISA法检测Anti-HIV具体比对结果为：阳性符合率90%，阴性符合率100%，总符合率98.3%，Kappa值=0.93，一致程度95%，可信区间[91.14%，99.71%]。CMIA法和ELISA法检测Anti-TP具体比对结果为：阳性符合率94%，阴性符合率98%，总符合率96%，Kappa值=0.94，一致程度95%，可信区间[90.16%，98.43%]。CMIA法和ELISA法检测Anti-HCV具体比对结果为：阳性符合率94%，阴性符合率98%，总符合率96%，Kappa值=0.94，一致程度95%，可信区间[90.16%，98.43%]。

表3 CMIA法和ELISA法方法学比较结果例

Kappa值范围为0.8～1说明两者几乎完全一致，本研究Kappa值范围为0.93～1，总符合率均>95%，因此从方法学上证实了ELISA法和CMIA法两者检测结果有高度的一致性。

2.5 分析测量范围验证结果

HBsAg线性回归方程为Y=1.022 7X-1.541 7，R2=0.998 2，R2＞0.95 且斜率在 0.97～1.03 范围内，表明该项目在此范围内有较好的相关性。研究表明，在乙型肝炎感染不同阶段HBsAg水平与HBV DNA水平有一定相关性，在慢性HBV感染自然史中HBsAg水平及其动态变化对HBsAg清除有较好的预测作用，HBsAg水平监测对干扰素、核苷（酸）类似物治疗疗效有一定评估价值[5]。因此，本研究对HBsAg测量范围进行分析，满足临床接受范围。

3 讨论

临床定性免疫检验结果准确可比是医疗卫生工作的基本需要，对检测系统进行主要性能评价，是检验质量的重要保证，其分析性能能够满足临床要求是医学实验室认可和检验结果互认的根本保证[6]。临床定性免疫检验重要常规检验项目的分析质量控制指标主要包括精密度、准确度、分析敏感性（即最低检出下限）、对转化血清盘的检测能力、分析特异性（交叉反应）和干扰因素等[7]。ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪采用吖啶酯将化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的原理进行测定，与ELISA技术相比，具有灵敏度高、特异性强、快速、稳定等优点。本研究中选取精密度、临界值附近精密度、最低检出限、方法学间比较、分析测量范围等指标进行性能验证以判断其是否能满足临床需求。

检测系统最主要的性能指标是准确度和精密度[8]。精密度是指规定条件下获得的相互独立的测量结果之间的一致程度，它是反映仪器整体性能的首要指标，也是进行其他方法学验证试验的前提[9]。本研究中选取2个有显著差异浓度的质控品（与厂家精密度评价时所用样本一致），所检测的精密度结果满足临床需求。

临界值可作为判断特定疾病、状态或被测量存在或不存在的界限的数值或量值。临界值附近精密度验证主要是验证在检测临界点浓度样本时临界值的有效性。此研究过程中，临界值附近精密度验证通过判断标准，也在一定程度上将本研究中临界值作为半定量检测的有效截点。

最低检出限是指可检测出的最低被测量浓度，是监测检测系统的性能指标，评价其所能测定的最低浓度，以确保检测质量[10]。检出限代表检测设备的分析灵敏度，而分析灵敏度又能反映检测系统或方法分辨微小分析物浓度差异的能力[11]。用于诊断感染的抗原和抗体的定性免疫测定，在不影响测定特异性的情况下，最低检出限越低越好。本研究 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV 的最低检出限均在厂家提供的范围内。

评价不同仪器、不同检测系统间结果的可接受性是实验室管理中实现质量目标的重要依据。本研究应用Kappa一致性检验对ELISA法和CMIA法检测进行数据分析，从方法学角度比较具有较高的一致性。

分析测量范围的建立有助于获得准确可靠的检验结果[12]。主要的评价方法为EP6-A法，在日常检测过程中，标本的真实浓度只有在分析测量范围内才能保证其可靠性，否则会引起结果的假性增高或偏低。本研究HBsAg项目R2值在允许范围内且能满足临床需求。

综上所述，对 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV 4项进行精密度、临界值附近精密度、最低检出限、方法学比较结果及分析测量范围的验证和评估均满足要求，因此ADVIA Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV 4项可运用于临床，对临床检验工作的质量保证、结果解释、满足医学实验室标准ISO 15189的认可要求及不同实验室间结果互认具有重要意义。