程熠，郭秋云，于世英，黄南，秦凯，赵荆，熊慧华

(华中科技大学同济医学院附属同济医院1.肿瘤科；2.过敏反应科，武汉 430030)

近年来，宫颈癌发病率逐年递增，且呈年轻化趋势，所以寻找一种高效的治疗药物刻不容缓。研究发现，大部分中药提取物具有耐药性低、多靶点的优势，如珊瑚姜油[1]、莪术油[2]、蓝萼香茶菜[3]等，均已在细胞学水平上证实对宫颈癌HeLa细胞的抗癌活性[4]。最新研究证实，苦参碱(matrine,Mat)在体内外对肿瘤具有较好的抑制作用[5-6]。笔者在本研究重点分析Mat对人体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用。报道如下。

1 资料与方法

1.1主要试剂 Mat(西安天园生物制剂公司，批号：16092517，含量：≥99%)；小牛血清(德国PAA公司)；达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's modified eagle's medium,DMEM)(Hyclone 公司，批号：AD22391271)；二甲亚砜(DMSO，Sigma-Aldrich公司，批号：RNBF8134)；考马斯亮蓝染液(海门市碧云天生物技术研究所)；噻唑蓝(MTT，北京索莱宝科技有限公司，批号：M8180)；碘化丙啶(propidium iodide，PI，Sigma-Aldrich公司，批号：P4170)。

1.2仪器 培养箱(上海跃进医疗器械厂，型号：HWJ-3-270)；酶标仪(美国伯滕仪器有限公司，型号：Lx800)；倒置显微镜(日本Olympus公司，型号：ZXPO)。

1.3细胞培养 人宫颈癌HeLa细胞系为本医院实验室保存，培养环境为浓度为10%小牛血清，DMEM；在5%二氧化碳(CO2)、37 ℃恒温培养箱中贴壁生长。

1.4MTT法测定细胞增殖抑制率 将对数生长期宫颈癌HeLa细胞制成单细胞悬液，将细胞密度调整为每孔6×103个，在96孔培养板培养，每孔细胞悬液体积为200 μL，培养4～6 h后待细胞完全贴壁，贴壁后加入0.5，1.0，1.5和2.0 g·L-1Mat，设置对照组，每组设5个复孔，于72 h后停止培养。细胞形态及密度在倒置显微镜下观察，在每孔加入5 mg·mL-1MTT溶液20 μL，保持37 ℃培养箱内连续孵育4 h，弃上清液，每孔加入DMSO 150 μL，最后避光摇匀，10 min后采用酶标仪测定吸光度(A值)，波长为490 nm。……