傅松年 阿不都克热木·阿不都热合曼 罗福祥 祖力喀尔·买买提 马丽 李治建

[摘要] 目的 探討贯叶金丝桃提取物（ESJWT）对小鼠行为学的影响。 方法 选取30只昆明小鼠，根据随机数字表法分为三组，每组10只，对照组给予等量纯化水，ESJWT低、高剂量组给予等量的供试品，连续给药14 d，测定小鼠自转棒掉落情况。选取50只昆明小鼠，根据随机数字表法分为对照组和ESJWT低、高剂量组，每组8只。对照组给予等量纯化水，ESJWT低、高剂量组给予等量的供试品，连续给药14 d，测试并记录小鼠5 min的自主活动量。 结果 三组小鼠给药后的转棒实验潜伏期比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。ESJWT低、高剂量组小鼠活动总路程较对照组明显缩短，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。ESJWT低、高剂量组小鼠四周活动路程较对照组短，ESJWT高剂量组小鼠四周活动进入次数较对照组少，差异有统计学意义（P < 0.05）。ESJWT高剂量组小鼠中心活动持续时间较ESJWT低剂量组、对照组短，ESJWT高剂量组小鼠中心活动进入次数较对照组少，ESJWT低、高剂量组小鼠中心活动潜伏期较对照组短，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。 结论 ESJWT可使小鼠自发活动量减少，对昆明小鼠的转棒实验无明显影响。

[关键词] 贯叶金丝桃提取物;小鼠;中枢神经系统;行为学

[中图分类号] R-332          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）07（c）-0017-04

Effects of Hypericum perforatum extract on mice behavior

FU Songnian1   Abudoukeremu·Abudoureheman2   LUO Fuxiang3   Zulikaer·Maimaiti3   MA Li3   LI Zhijian3

1.Psychological Medical Center， the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Xinjiang Uygur Autonomous Region， Urumqi   830011， China; 2.School of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Xinjiang Uygur Autonomous Region， Urumqi   830011， China; 3.Department of Toxicology， Uygur Medical Research Institute， Xinjiang Uygur Autonomous Region， Urumqi   830049， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of Hypericum perforatum extract （ESJWT） on of behavior in mice. Methods Thirty Kunming mice were randomly divided into three groups according to the random number table method， with 10 mice in each group. The control group was given the same amount of purified water， and the ESJWT low and high dose groups were given the same amount of samples for 14 days. The drop of the rotating rod in mice was determined. 50 Kunming mice were randomly divided into control group and ESJWT low-dose and high-dose groups with 8 mice in each group. The control group was given the same amount of purified water， and the ESJWT low-dose and high-dose groups were given the same amount of samples for 14 days. The voluntary activity of mice for 5 minutes was measured and recorded. Results There was no significant difference in the latency of rod rotation test among the three groups （P > 0.05）. Total activity distance of ESJWT mice in low and high dose groups was significantly shorter than that in control group， the difference was highly statistically significant （P < 0.01）. All around activity distance of mice in low and high dose ESJWT group was shorter than that in control group， the number of all around activity entry in ESJWT high-dose group was less than that in control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. The duration of central activity in ESJWT high dose group was shorter than that in ESJWT low-dose group and control group， the number of central activity entry in ESJWT high-dose group was less than that in control group， the latency of central activity in ESJWT low and high dose group was shorter than that in control group， the difference was statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion ESJWT can reduce the spontaneous activity of mice， and has no significant effect on the rod test of Kunming mice.

[Key words] Hypericum perforatum extract; Mice; Central nervous system; Behavior

贯叶金丝桃（Hypericum perforatum L.）为藤黄科金丝桃属植物。全世界有400余种，我国有55种8个亚种，新疆盛产的贯叶金丝桃就是其中之一。受传统中医药学的影响，新疆民间习用已久。我国原卫生部和药典委员会编《药品标准·维吾尔药分册》[1]，对其性味功能进行了描述：三级干热，软化寒湿，通经利尿，用于寒湿肿痛，小便不通，外敷可治疗烧伤及关节炎等，但未提及对中枢神经系统作用。贯叶金丝桃化学成分贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素，对轻中度抑郁动物模型，显示明显抗抑郁作用[2-3]。金刚烷胺间苯三酚类尚可抑制肿瘤细胞和抗病毒[4]。贯叶金丝桃提取物（ESJWT）主要有效成分为金丝桃素和贯叶金丝桃素（含量不低于总量的3%），具有多重抗抑郁作用，能有效抑制突触前5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）和多巴胺（DA）的再吸收[5]，临床上常用于焦虑、抑郁患者的治疗，疗效确切[6];还具有抗炎和止痛作用[7-8]。作为纯植物抗抑郁药，ESJWT的疗效与化学类抗抑郁药相当[6，9]。但其对中枢神经系统的潜在影响尚不明确，本文用ESJWT对小鼠进行实验，旨在观察其在对小鼠运动、协调能力及对小鼠自发活动量方面的作用，为临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 药品

ESJWT[商品名：路优泰，德国威玛舒培博士药厂，生产批号：0070417，每片重0.56 g（贯叶金丝桃素含量不少于0.9 mg，总金丝桃素含量不少于0.4 mg）]，将ESJWT常规粉碎，使用相应体积生理盐水混匀放入均质器进行振荡，按小鼠平均体质量配置成6 g/L的混悬液，放入4℃冰箱备用。

1.2 实验动物

昆明小鼠，无特殊病原菌级（SPF），4～5周龄，体重18～22 g/25 d，雌雄各半，购自新疆维吾尔自治区实验动物研究中心，SCXK（新）2016-0001。实验动物喂养环境：新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所SPF级动物房。饲养在塑料笼内，每笼饲养性动物不多于5只，自由饮水。相对湿度：40%～70%，室温：20～26℃，光照12 h，实验正式开始前经检疫和适应性饲养，实验开始前经3 d的一般检疫观察，选择健康动物进行实验。

1.3 仪器

ZB-200疲劳转棒仪，成都泰盟科技有限公司。XR-XY1032旷场视频分析系统，上海欣软信息科技有限公司。

1.4 小鼠转棒实验

ESJWT成人口服，0.56 g/次，2～3次/d，即1.68 g/d，成人按照60 kg计算，即0.028 g/kg。按照小鼠体表面积系数ESJWT等效剂量为0.35 g/kg，设为低剂量，为充分暴露ESJWT对中枢神经系统可能的潜在影响，高剂量设为3.90 g/kg。小鼠检疫适应期结束之日，称未禁食体重，在给药前对所有动物进行转棒实验，淘汰数值偏差过大动物，30只小鼠根据随机数字表法分三组，每组10只，对照组给予等量纯化水，ESJWT低、高剂量组给予等量的供试品，连续给药14 d，均为灌胃给药。末次给药后60 min，将小鼠放置转棒上，转速16 r/min，测定小鼠自转棒掉落情况。以小鼠从转棒上掉下的时间为潜伏期时间，作为测定比较指标，超过5 min（300 s）者按5 min计[10]。

1.5 自主活动实验

取50只昆明小鼠，将每只小鼠放入自主活动测试仪反应箱中，每箱1只，每次5 min，适应3次。适应完成后根据随机数字表法分为对照组和ESJWT低、高剂量组，剂量设计同催眠作用协同实验，每组8只。对照组给予等量纯化水，ESJWT低、高剂量组给予等量的供试品，连续给药14 d，均为灌胃给药。第14天各组小鼠给药1 h后，放入反应箱中，测试并记錄小鼠5 min的自主活动量[11]，包括活动总路程（mm）、总时间（s）、平均速度（mm/s）、静止时间（s），四周活动的路程（mm）、持续时间（s）、平均速度（mm/s）、进入次数、潜伏期（s）、静止时间（s）以及中心活动的路程（mm）、持续时间（s）、平均速度（mm/s）、进入次数、潜伏期（s）、静止时间（s）等指标。

1.6 统计学方法

数据采用SPSS 20.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较，根据方差齐性检验，方差齐使用LSD法，方差不齐使用Tamhane′s T2法，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠转棒实验结果

三组小鼠给药后的转棒实验潜伏期比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 小鼠自主活动结果

ESJWT低、高剂量组小鼠活动总路程较对照组明显缩短，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表2。ESJWT低、高剂量组小鼠四周活动路程较对照组短，ESJWT高剂量组小鼠四周活动进入次数较对照组少，差异有统计学意义（P < 0.05）。ESJWT高剂量组小鼠中心活动持续时间较ESJWT低剂量组、对照组短，ESJWT高剂量组小鼠中心活动进入次数较对照组少，ESJWT低、高剂量组小鼠中心活动潜伏期较对照组短，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。见表3。

3 讨论

目前，ESJWT已在国内临床中广泛应用于治疗轻、中度抑郁症，焦虑和烦躁不安等疾病[12]。作为纯植物抗抑郁药，ESJWT的疗效与化学类抗抑郁药相当。ESJWT能够均衡地抑制重吸收泵对5-HT、NE、DA的再摄取，以及γ-氨基丁酸（GABA）、L-谷氨酸的再摄取;其次，ESJWT可下调突触前膜β-肾上腺素能受体的密度，使三种神经递质在突触前膜与β-肾上腺素能受体结合的机会减少，即三种神经递质在突触前膜的重吸收减少，反馈性地增加三种神经递质的合成与释放，最终导致三种神经递质在突触间隙的浓度增加，这种非特异性作用机制是ESJWT抗抑郁的独特之处[13-15]。关于苯丙氨酸对上述五种递质再摄取抑制的机制，其一是金丝桃素提高了突触体细胞内钠离子浓度[16]，其二是细胞内H+-ATP+酶引起突触小泡跨膜pH梯度是单胺吸收和存储的主要动力，贯叶金丝桃素可以与质子偶联剂（FCCP）一样，使小泡释放出质子，从而降低pH梯度，减小递质的再摄取[17]。亦是非选择性抑制递质再摄取的原因。

ESJWT批准的适应证为抑郁症、焦虑和烦躁不安[18-19]。常用量为成人和12岁以上儿童，每日300 mg，每日口服2次或3次。日剂量不超过800 mg，维持剂量为每日300～600 mg，疗程为3～6个月。主要不良反应表现为头晕、疲劳、镇静，当与5-HT抑制剂联用时不良反应会加重，可能因其活性成分诱导细胞色素P-450酶代谢，引起CYP3A4和CYP1A2作用[20]。因此，其中枢神经系统的副作用值得关注。本研究采用安全药理学的方法，研究ESJWT在治疗范围内或治疗范围以上的剂量时，潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响，即观察药物对中枢神经系统的影响。本研究采用ESJWT对小鼠转棒和小鼠自发活动实验的影响，进行功能组合实验，定性和定量评价给药后动物的运动功能、行为改变、协调功能的变化等，以确定药物对中枢神经系统的影响。研究结果显示，ESJWT药效剂量下小鼠自转棒掉落的潜伏期与对照组在给药前后无显著性差异，但对小鼠自主活动有明显抑制作用、可延长自主活动潜伏期。ESJWT可使小鼠自发活动量明显减少。本研究为其临床主要不良反应头晕、疲劳、镇静等表现提供了安全药理学数据，在超剂量或者长期服用本品时，应注意对中枢神经系统可能出现对人体不良影响，应严格按照说明书指导临床用药。另外，徐立等[21]通过皮下注射利血平诱导小鼠抑郁症模型，证明贯叶金丝桃总黄酮对抑郁症有明确的治疗作用，可明显对抗小鼠行为绝望及获得性无助，延长小鼠睡眠时间，明显抑制小鼠眼睑下垂及自主活动减少。因此，ESJWT对正常小鼠和抑郁症小鼠均有明显减少自主活动的作用，其影响自主活动的作用机制有待进一步研究。

[参考文献]

[1]  卫生部，药典委员会.药品标准·维吾尔药分册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版，1999：71.

[2]  马洁.贯叶金丝桃和腺点金丝桃的化学成分研究[D].北京：中国医学科学院药物研究所，2012.

[3]  高万.糙枝金丝桃化学成分研究[D].北京：中国医学科学院药物研究所，2016.

[4]  时梦娇.贯叶金丝桃和尖萼金丝桃的化学成分研究[D].北京：中国医学科学院药物研究所，2018.

[5]  Müller WE. Current St John′s wort research frommode of action to clinical efficacy [J]. Pharmacol Res，2003，47（2）：101-109.

[6]  Ng QX，Venkatanarayanan N，Ho CY. Clinical useof Hypericum perforatum（St John′s wort）in depression：a meta-analysis [J]. J Affect Disord，2017，210：211-221.

[7]  Hohmann MS，Cardoso RD，Fattori V，et al. Hypericum perforatumreduces paracetamol- induced hepatotoxicity andlethality in mice by modulating inflammation andoxidative stress [J]. Phytother Res，2015，29（7）：1097-1101.

[8]  Vakili F，Mirmohammadaliei M，Montazeri A，et al. Impact of hypericum perforatum ointment on perineal pain intensity following episiotomy：a randomized placebo-controlled trial [J]. Caring Sci，2018，7（4）：205-211.

[9]  Yan XT，An Z，Huangfu Y，et al. Polycyclic polyprenylated acylphloroglucinol and phenolic metabolites from the aerial parts of Hypericum elatoides and their neuroprotective and anti-neuroinflammatory activities [J]. Phytochem，2018， 26：159：65-74.

[10]  Galeotti N. Hypericum perforatum（St John′s wort）beyond depression：a therapeutic perspective for pain conditions [J]. J Ethnopharmacol，2017，200：136-146.

[11]  謝国旗，郝少君，苏峰，等.清脑片对小鼠转轮及转棒平衡能力的影响[J].实用药物与临床，2016，19（10）：1232-1234.

[12]  Barnes J，Arnason JT，Roufogalis BD. St John′s wort （Hypericum perforatum L.）：botanical，chemical，pharmacological and clinical advances [J].J Pharm Pharmacol，2019，71（1）：1-3.

[13]  王亚茹，于世家.自拟安眠方对小鼠自主活动及协同戊巴比妥钠睡眠实验的影响[J].湖南中医药大学学报，2017， 37（9）：935-938.

[14]  Mueller WE，Current St. John′s wort research from mode of action toclinical efficacy [J]. Pharmacol Res，2003，47（2）：101-109.

[15]  Mueller WE，Singer A，Wonnemann W，et al. Hyperforin represents theneurotransmitter reuptakeinhibiting constituent of hypericum extract [J]. Pharmacopsychiatry，1998，31（Suppl 1）：16-21.

[16]  Singer A，Wonnemann M，Muller WE. Hyper-forin a major antidepressant constituent of St-John′s Wort，inhibits serotonin uptake by elevating free intracellular Na+ [J]. J Pharmacol Exp Ther，1999，290：1363-1368.

[17]  Muller WE，Singer A，Wonnemann W. Hyperforin-antidepressant by a novel machanism of action [J]. Pharmacopsychiatry，2001，34（1）：98-102.

[18]  劉旭霞，孟焕然，马振华，等.路优泰联合绝经激素治疗对围绝经期抑郁症的疗效分析[J].宁夏医学杂志，2018， 8（40）：704-707.

[19]  王彩宁，温爱萍，杨梅柳，等.喜普妙与路优泰对躯体化抑郁症的疗效及脑电图研究[J].中国药业，2018，21（26）：39-41.

[20]  Francesca B，Angelo A. Herb-drug interactions with St-John′s Wort（Hypericum perforayum）：an update on clinical observations [J]. AAPS J，2009，11：710-726.

[21]  徐立，魏翠娥，赵明波，等.贯叶金丝桃总黄酮对小鼠抑郁症模型的实验研究[J].中国中药杂志，2005，30（15）：1184-1188.